大肠杆菌在液体培养基中培养不出来

1、标准菌株：直接从官方菌种保藏机构获得并至少定义到属或种的水平的菌株。通常默认为第0代菌株。 2、标准储备菌株：将标准菌株在实验室转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株。通常为第1代或第2代菌株。 3、储备菌株：从标准储备菌株转接一代获得的培养物。通常为第2代或第3代菌株。 4、工作菌株：由标准储备菌株、 储备菌株或标准物质（经证明或未经证明） 转接一代获得的菌株。通常为第3-5代菌。 传代：每一次的转接培养都是一次传代的过程，可以使用液体、固体或半固体培养基。

买到的二代菌种最多可以传到5代。二代菌种一般进行3次传代，为防止菌种突变，最多传到5代。二代菌种，这个菌种的原材料，都是采用的红桑木，桑黄桑花。

就是把菌种转移到新的培养基中，培养一段时间，直到其生长量满足需要

首先，从表面上是看不出传代的代数的，所以不要指望从外观或者细菌的生化现象判断传了多少代。但是，每个实验室在进行细菌传代时，都应该具体记录传代的次数和传代后的情况，刚刚获得菌种时也应该记录菌种的情况。所以要知道具体的传代次数，只能从实验室的原始记录获得。微生物传代最常用的就是斜面接种法,大致意思就是你从原代菌种里挑一点划线法保存到小试管里的斜面培养基上,进而让菌种不断增殖保存下来.其方法步骤如下：　　首先,点燃酒精灯.将菌种和斜面培养基的两只试管平行放在左手上,用拇指与其它四指夹住,并使中指位于两试管之间,两试管的管口齐平（图9－5①）.　　其次,用右手先将棉塞拧转松动,并稍拉出一些,以利又质卑纬觯ㄍ?9－5②）.　　第三,右手持接种针,在酒精灯将针头部分烧红灭菌（图9-5③）.针头以上凡是接种时可能进入试管的部分,均应用火灼烧.　　以下操作都要使试管口靠近火旁.　　第四,用右手的小指与掌间拔掉左手上两只试管上的棉塞,同时迅速将试管口在酒精灯上烧灼3秒钟左右,使管口上可能沾染的少量杂菌得以烧死.　　第五,将烧过的接种针伸入菌种管内,先将针头接触培养基上没有菌的部位（如斜面的顶端）,使其冷却,以免烫死被接种的菌体.然后轻轻接触菌体,取出少许,慢慢将接种针抽出试管,接种针抽出时不要使针头部分碰到管壁和管口,取出后,不可使针头通过火焰,更不可触及其它无关物品或桌面.　　第六,迅速将接种针伸进另一试管,在培养基上轻轻划线,接种菌体于其上.划线时,要由底部起划较密的平行线,一直划到顶部,以充分利用斜面面积,但不要将培养基划破.　　第七,烧灼试管口,将棉塞塞上.塞棉塞时,不要移动试管迎接棉塞,以免试管在移动中纳入可能含菌的空气.　　第八,将针头在火焰上烧灼灭菌.放回原处后,腾出手将棉塞塞紧.二、关于微生物酶活性测定,比较复杂,网上比较多,不同酶测定方法也不一样,同学你自己慢慢查吧,

菌种复苏一般指将保藏在冻干管等的菌种取出，备用。活化一般指将菌种使用之前（一般是应用到工程等，比如废水处理系统当中），将原来孢子状态的转化为杆菌等，预先适应环境的过程。复壮——其中一种是从退化菌种的群体中找出少数尚未退化的个体，以达到恢复菌种的原有典型性状。另一种是在菌种的生产性能尚未退化前就经常而有意识地进行纯种分离和生产性能的测定工作，以达到菌种的生产性能逐步有所提高。退化菌种的复壮可通过纯种分离和性能测定等方法来实现。传代—— 指将菌种再传到斜面等介质，让菌种再生长一代。

菌株传代方法：菌斜面菌斜面（保存）：培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。标签上著名菌名及接种日期。至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开棉塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。取出接种棒，在火焰旁将培养基管棉塞堵上，然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。将已接种毕的细菌管置35~37℃培养22~24小时，霉菌管一般置20~25℃霉菌培养箱内培养7日。取出后放人冰箱保存，一般 3个月转种一次。菌斜面营养肉汤分离平板菌斜面如果菌落形态不典型可纯化，按下列方法传代（分离菌落） ：用接种环取上述菌管（斜面）菌苔少许接种置营养肉汤中(5ml/支,已灭菌), 置35~37℃培养18~24小时后，再用接种环取培养好的营养肉汤菌悬液（浓菌液），接种于分离平板，置35~37℃培养18~24小时，用接种针选典型菌落划线于营养琼脂斜面，置35~37℃培养18~24小时。一般同时接种几支管，其中一支用于以后菌种传代或接种到半固体琼脂培养基中，其它用做工作菌种。常用分离平板：大肠埃希菌——EMB琼脂平板铜绿假单胞菌——溴化十六烷三甲铵琼脂培养基金黄色葡萄球菌——甘露醇氯化钠琼脂培养基

首先，从表面上是看不出传代的代数的，所以不要指望从外观或者细菌的生化现象判断传了多少代。但是，每个实验室在进行细菌传代时，都应该具体记录传代的次数和传代后的情况，刚刚获得菌种时也应该记录菌种的情况。所以要知道具体的传代次数，只能从实验室的原始记录获得。

美国药典（USP）中规定：“将微生物接种至一新鲜培养基上/内，每萌发一次即称为一代，因此，当原始菌种复溶并转至一培养基内生长，即认为已传代一次，” 并规定“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”。我国的GMP认证中也如此要求，并且中国药典2005年版药典也已做出“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”这个明确的规定。实验室菌种的传代保藏过程1. 按菌种说明书要求复溶菌粉，转种于适当的增菌培养基内（G1），复壮后转接至平板上，并于适当温度下培养适当时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代（G2）。2. 菌种鉴定完成后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌落转接斜面菌种作为工作用菌种。此时，保藏菌种为第2代，但工作用菌种则为第三代。3. 将第2代菌种管冷冻保存，将工作用菌种于适当温度下培养适当时间后可用于试验。4. 取一支冷冻保存的G2代菌种转种于平板和斜面培养基上，平板上的菌种制成冷冻保藏管第三代（G3），斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用菌种（W3）。5. 将第三代菌种（G3）冷冻或低温保存，将生长、转种后的G2菌种经灭菌处理后丢弃。6. 当工作用菌种代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种，如W3可直接转接为W4。7. 按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序、保藏和使用菌种。以上方法中，菌种被分为两类。传代用菌种和工作用菌种，传代用菌种用于甘油冷冻管法保藏，工作用菌种用斜面低温保藏法保藏。实验证明，甘油冷冻管的有效期至少为2年，但其主要适用于细菌（需氧）、酵母菌的传代、保藏、对厌氧菌、真菌和芽孢类细菌则需应用其它方法。

将目标菌接种于液体培养基或划种于固体琼脂培养基（保存过久的菌种最好先用液体培养基增菌，因为保存后可能会使细菌丢失一些性状），之后进行培养，培养所获得的培养物即为传代所获得的细菌。严格的话，每传三代应做一次菌种鉴定，以防过程中出现误差而导致菌种错误。细菌培养一般过夜就行了，时间长了就死了。

活化一般指将菌种使用之前，将原来孢子状态的转化为杆菌等,预先适应环境的过程.鞭毛染色的菌种先传几代，使菌种活化，预先适应环境，一般都是传代2~3代。幼龄菌种更具有活性，老龄菌种容易脱落鞭毛，且菌龄太老,由于菌体死亡或自溶可能对染色结果产生影响。

正确答案:A解析：真菌的培养方法主要有三种：试管培养是真菌分离培养、传代和保存菌种最常用的方法；玻片培养可用于真菌菌种鉴定；平皿培养只能用于生长繁殖较快的真菌。

斜面传代就直接接种斜面，培养好后保存。文献很多。斜面传代不能太多，菌株容易退化。最好采用低温冷冻或真空干燥保存。

菌种的接种：将细菌接种到培养基中。传代：将接种繁殖一定数量的细菌分配到几个培养基中

你是指代时？？ 传代时间视具体情况而不同，比如我们实验室冻存的阳性菌可以保存1年不用传代。代时的话不同微生物的代时范围是20min~10h 大肠埃希菌：20min 枯草芽孢杆菌：28min 金黄色葡萄球菌：30min 铜绿假单胞菌：35min

为了要扩大菌种的数量。

《中华人民共和国药典》2010年版二部附录 XiX N 抑菌剂效力检查法指导原则

传几次就是几代。初始菌最好是单菌落。

（1）减少扩接食用菌的退化、种性变异，是在繁殖过程中发生的，常用控制菌种移接次数来防止。生产中，应减少菌种扩接次数。当获得优良菌种后，其转管扩接最多不超过5次。（2）防止基因突变可用低温保藏菌种，一般在0～4℃之间。目前国内外公认防止菌种退化的方法是在液态氮超低温条件下保藏菌种。（3）分离纯化对保藏的优质菌种，需要经常分离纯化。一般每次生产出菇后，都应挑选符合本品种特征的优良子实体，进行组织分离。每年进行1次孢子分离，经出菇鉴定后，选择性状优良的再进行组织分离。总之，有性孢子分离与无性组织分离要交替使用。用有性繁殖来发现好的变异菌株，用组织分离来巩固这些优良菌株的遗传特性。（4）菌种复壮复壮只能使菌种恢复健康，而不能使其恢复年轻。当某一菌种因环境条件不适宜，生产发育不良时，给予它适宜的条件，菌种比原来长得旺盛起来，就叫复壮。复壮的措施很多，诸如选择该菌种适合的培养基、培养温度、环境、pH、防止杂菌污染及避免多品种混合栽培等。（5）添加维生素E在培养基中加入维生素E，可防止菌种衰退。方法是：马铃薯葡萄糖琼脂培养基分装试管后，每管用针筒注入1粒维生素E胶丸溶液，再按常规灭菌、制作斜面和接种。（6）改善环境三级菌种培育过程，都必须创造菌丝生长最适温度进行培养，人为控制低温或高温，并注意培养室空气的更新，以及室内外清洁卫生，不断创造良好的生态条件。

可以 正常传代时间1-3天都可以的

因为冻干的过程对1代菌种伤害较大。相关实验表明，一般菌种保藏中心的冻干管复苏后，并不推荐1代菌种就保藏或使用，因为冻干的过程对菌种伤害较大，所以一般推荐用2代之后的菌种来保藏或作为工作菌株。微生物菌种1代是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养，任何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。

这个应该是人为控制的。例如多储备原始菌种。不对外扩散。严格控制菌种转接的次数等等。

液氮罐、挂屉、冻存管、移液枪、超净台

是。一代菌种是用菌种转接下一代工作用菌种，由此是工作菌种。工作菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

不是。菌种溶解剂主要用于分散细菌菌落中的细菌，而不是用于细菌的培养和繁殖。所以菌种溶解剂不是传代。菌种溶解剂是一种用于溶解细菌菌种的溶液，通常包含一些化学物质，如盐和缓冲剂。它的主要作用是将细菌菌落中的细菌分散到溶液中，以便进行后续的培养和研究。

在中检所买回冻干菌种后，复活传代就可以了

如果是2代的话。只能再转一次栽培种了。常温条件下保存15天左右。

都是斜面接种。

益生菌都是看菌种，如果过期了，菌也就死光了，吃了也没有效果了。微生物菌种如何保存呢？作为从业人员，你不得不了解什么传代保藏法、液体石蜡保存法、载体保存法、悬液保存法、寄主保存法、冷冻保存法、甘油管保存法等等，下面咱们一起来涨知识吧。1、传代保存法有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。　　一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传性状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。2、液体石蜡覆盖保存法该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。3、载体保存法即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤(5克)，置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基(以含水量为土壤最大持水量的60%为宜)，然后高压灭菌。再将需保存的微生物进行大量接种，培养至菌丝能用肉眼确认的程度为止，移入干燥器中经短时间干燥或风干后密封，冷藏或室温保存。②砂土保存法：取清洁的砂，筛去掉大砂粒，并用磁铁吸去砂中铁屑，再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗数次，干燥后，置于试管或安瓶管中保持2-3cm深，再经干热灭菌后，加入1mL菌种培养液，经充分混匀后，放入真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗净的砂(经HCl预处理)和一份贫瘠、过筛的黄土搀和后灭菌，再进行菌种保藏。③硅胶保存法：以6~16目的无色硅胶代替砂子，干热灭菌后，加入菌液。加菌液时，由于硅胶的吸附热常使温度升高，因而需设法加以冷却。④磁珠保存法：将菌液浸入素烧磁珠(或多孔玻璃珠)后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入1/2管高的硅胶(或无水CaSO4)，上铺玻璃棉，再放上10~20粒磁珠，经干热灭菌后，接入菌悬液，最后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。本法对酵母菌很有效，特别适用于根瘤菌，可保存长达两年半时间。⑤麸皮保存法：在麸皮内加入60%的水，经灭菌后接种培养，最后干燥保藏。⑥纸片(滤纸)保存法：将灭菌纸片浸入培养液或菌悬液中，常压或减压干燥后，置于装有干燥剂的容器内进行保存。4、悬液保存法即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的方法有：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。5、寄主保存法即令微生物侵入其寄主后加以保存的方法。用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。6、冷冻保存法适用于抗冻力强的微生物。这些微生物可在其菌体细胞外遭受冻结的情况下而不受损伤，而对其它大多数微生物而言，无论在细胞外冻结还是在细胞内冻结，都会对菌体造成损伤，当采用这种保藏方法时，应注意以下几点：①要选择适于冷冻干燥的菌龄细胞。②要选择适宜的培养基，因为某些微生物对冷冻的抵抗力，常随培养基成分的变化而显示出巨大差异。③要选择合适的菌液浓度，通常菌液浓度越高，生存率越高，保存期也越长。④最好在菌液内不添加电解质(如食盐等)。⑤可在菌液内添加甘油等保护剂，以防止在冷冻过程中出现菌体大量死亡的现象。同样，也可添加各种糖类、去纤维血液和脱脂牛乳等具有良好保护效果的溶剂，但对有些微生物而言，不加保护剂时更有效。⑥原则上应尽快进行冷冻处理，但当加入保护剂时，可静置一段时间后再进行处理。⑦就动物细胞而言，应在-20℃范围内以1℃/min左右的速度缓慢降温，此后必须尽快降到贮藏温度；而对绝大多数微生物而言，则不必如此，如结构较为复杂的原虫则可在-35℃范围内进行缓慢降温，而噬菌体则必需采用上述的二阶段法进行冷冻。⑧若进行长期保存，则贮藏温度越低越好。⑨取用冷冻保存的菌种时，应采取速融措施，即在35-40℃温水中轻轻振荡使之迅速融解。而就厌氧菌来说，则应选择静置融化的措施。当冷冻菌融化后，应尽量避免再次冷冻，否则菌体的存活率将显著下降。常用的冷冻保存法包括：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存；③液氮保存法(-196℃)：是适用范围最广的微生物保存法。其操作步骤如下：a、装安瓶管：使用尽量浓厚的菌体悬浮于含有适当防冻剂(保存霉菌不用防冻剂)的灭菌溶液中，将0.2-1mL的这种溶液分装于安瓶中，或在装有分散剂的安瓶中直接接种，或将菌丝体琼脂块直接悬浮于分散剂中。b、熔封安瓶管：若直接贮存于气相液氮中(-150℃～-170℃)时，则不需熔封。c、检查安瓶管是否熔封良好：即在4℃下，将熔封安瓶管在适当的色素溶液中浸泡2-30分钟后，观察有无色素进入安瓶。d、缓慢冷却：将熔封安瓶管置于小罐中，然后用液氮气以约1℃/min的速度冷却至-25℃左右，也可在-20℃~-25℃的冰箱内缓慢冷却30~60min。e、速冷：最后浸入液氮中快速冷却至-196℃。7、冷冻干燥保存法其原理是首先将微生物冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分。事实上，从菌体中除去大部分水分后，细胞的生理活动就会停止，因此可以达到长期维持生命状态的目的。该方法适用于绝大多数微生物菌种(包括噬菌体和立克次氏体等)的保存。在进行冷冻干燥时，需注意以下几个问题：　a、冷冻干燥前的培养条件：首先检验菌种纯度。一般地说，将待保存的微生物在营养丰富且容易增菌的培养基上进行培养为宜;菌龄以达到对数生长期为好;若为有芽孢或孢子的微生物，则以芽孢和孢子形成以后进行保存为好;菌液浓度以高为好，如细菌应达到109～1010/mL。b、菌株号码等的标记：可在安瓶外侧标记或在安瓶内封入标签。c、安瓶的准备：将安瓶在2%HCl中浸泡过夜，自来水冲洗3次后，蒸馏水刷净，干燥，塞棉塞，贴标签，干热灭菌或温热灭菌后，60℃恒温干燥。d、添加保护剂：常用的保护剂有脱脂乳、12%蔗糖、加7.5%葡萄糖的普通肉汤以及加7.5%葡萄糖的血清等。8、甘油管保藏法在5ml菌种保藏管中，将等体积的菌悬液和40%的甘油充分混匀后，于-20℃冰箱中保存。

这一节主要讲菌种，为啥菌种也是很重要呢？培养基的质量保证了，接下来影响实验结果的一个重要原因是菌种，菌种在实验过程中充当了一个什么样的角色呢？比如做微生物限度检查，供试品长菌了，阳性的作用是用来做整个实验的对照，判断长出来的是否是对照菌，如果肉眼看不出来，就用革兰氏染色法放在显微镜下观察，在这个过程中要求我们的对照菌株一定要纯，所以实验室的菌种可以在国家菌种保藏中心购买，买回来分离纯化后用甘油在-30℃或-80℃下保存，可以使菌种存活时间更长；也可以制成菌悬液或斜面，每周或每月转种一次 工作菌种一般传代不得超过五次，避免传代次数增多造成菌种的变异和老化，从菌种中心购买的菌种为0代，任何的接种过程都被视为传代一次，传代出来的菌种每周观察一次，不正常的菌株要及时销毁，定期对菌株的纯度和活力进行检测 菌种的质量依赖于良好的培养基，合适的操作步骤和保藏条件，一般菌种保藏在2~8℃的冰箱里，铜绿则放在常温下保存，每支菌种都需要贴上标签，标明名称，传代次数，菌种编号，有效期等，用完后一般在当天内销毁 关于菌种的有：复苏、菌种观察、传代和使用、菌液制备、销毁等记录 总结一下这一节所讲的内容，菌种的保藏和管理 保藏：放在冰箱和常温下保存，也可以放在-30或-80℃下保存 对于菌种的管理需要有一整套的管理规程，比如传代次数，过程操作和记录

刚从组织中分离出来培养的细胞叫原代细胞.细胞长满以后用胰酶消化分几瓶培养,就叫传代.传一次代一代,再传就两代.

1、由于重力的作用使培养基表面及次层能富集微生物生长所需的营养物质，利于微生物生长。2、防止空气中微生物的污染培养基及培养物：倒置时平板内的空气是不流动的，杂菌不会沉降到培养基表面，如果不倒置，很快平板周边会长起杂菌。3、倒置培养使琼脂里水分不易蒸发出去，而充分的保持琼脂的弹性与细菌容易繁殖和生存的环境。如果不倒置，大概3天左右培养基就会出现龟裂等水分散失的情况。而一些落菌等试验，需验证培养基无菌，就要先倒置培养48小时才可作为模板做落菌，水分散失是很重要的。接种是食用菌生产中的关键环节之一，也叫做播种。如果接种技术不过关，即会造成杂菌污染，成活率低而前功尽弃，更谈不上栽培了。无论是菌种分离、传代还是扩繁，都要在无菌条件下严格按照无菌操作规程进行。扩展资料：闲置超过30天的接种室和缓冲间重新使用前，墙壁需用2%来苏儿喷湿消毒。对新改建或闲置3个月以上没用的接种室，使用前，室内墙壁要用石灰浆粉刷，水泥地面用清水冲刷。用杀菌后的备用接种钩，除去母种斜面的尖端部分以及中央的母种块，随后将接种钩放回母种试管。 左手持预接种的试管培养基，管口稍向下倾斜，用右手小拇指和无名指、食指和中指持接种钩，从母种试管内钩取直径约2mm大小的种块。放入预接种培养基斜面中央，抽出接种钩，放回母种试管，轻燎右手所持棉塞，旋转式塞入接过菌的试管，由右手放到适当位置，连续完成所有预接种试管。参考资料来源：百度百科——接种

母种：从蘑菇上直接分离得到的菌种（试管种，用培养基培养）原种：由母种扩大繁殖得到的菌种（瓶装种，用培养料培养，一般多拿罐头瓶或者小袋子培养）栽培种：由原种扩大繁殖得到的菌种（袋装种，用培养料培养，一般都拿蘑菇袋子培养）母种用来保存菌种，原种用来扩大菌种，栽培种用来生产的。从孢子或组织分离得到的第一次菌丝体叫第一级种，也叫母种。母种从生物学看，对养分的吸收、对环境的适应都要进一步驯化。第一次菌丝体可以在相同培养条件下扩大生产，一般再转一次管较好，从转出的试管菌种选择优良的菌株作为母种。这个方法叫转管培养。把母种转入与栽培料接近的营养基质上得到第二级种，叫原种。把原种再接入相同的培养基内叫三级种，也叫生产种或栽培种。这种菌种是直接用于生产的，需求数量大。由第一级种转至第三级种的过程叫转接菌种。也就是常说的菌种传代培养。 所以呢，是因为它对环境的适应能力及养份吸收能力较差，所以如果直接用它进行栽培会影响到栽培效率和出菇率，笨笨猪，好懒哦你，自己上网找资料虽然麻烦点但是会学到更多的

如果是筛选好氧菌的话，一般37℃，24小时就有足够浓度了，可以进行筛选。如果是保存的话4℃那么1周就要转一次培养基，否则菌种就会退化。

如果是传代的话， 那么就是传一次即为一代，一般20代以内会有退化，而复壮并不是楼主想的那样，虽然也是在不停的传和分离，但是目的是从中挑取没有退化的好的菌株，通过营养强化的方式使其得以保存下来的。

这已经完成了黑曲霉的传代，黑曲霉的传代不同于其他的菌，不需要増菌这一过程，只需加入吐温稀释液拍打下孢子，在新配好的斜面培养基上培养就行了。

微生物传代最常用的就是斜面接种法，大致意思就是你从原代菌种里挑一点划线法保存到小试管里的斜面培养基上，进而让菌种不断增殖保存下来。 其方法步骤如下：　　首先，点燃酒精灯。将菌种和斜面培养基的两只试管平行放在左手上，用拇指与其它四指夹住，并使中指位于两试管之间，两试管的管口齐平（图9－5①）。　　其次，用右手先将棉塞拧转松动，并稍拉出一些，以利又质卑纬觯ㄍ?9－5②）。　　第三，右手持接种针，在酒精灯将针头部分烧红灭菌（图9-5③）。针头以上凡是接种时可能进入试管的部分，均应用火灼烧。　　以下操作都要使试管口靠近火旁。　　第四，用右手的小指与掌间拔掉左手上两只试管上的棉塞，同时迅速将试管口在酒精灯上烧灼3秒钟左右，使管口上可能沾染的少量杂菌得以烧死。　　第五，将烧过的接种针伸入菌种管内，先将针头接触培养基上没有菌的部位（如斜面的顶端），使其冷却，以免烫死被接种的菌体。然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种针抽出试管，接种针抽出时不要使针头部分碰到管壁和管口，取出后，不可使针头通过火焰，更不可触及其它无关物品或桌面。　　第六，迅速将接种针伸进另一试管，在培养基上轻轻划线，接种菌体于其上。划线时，要由底部起划较密的平行线，一直划到顶部，以充分利用斜面面积，但不要将培养基划破。　　第七，烧灼试管口，将棉塞塞上。塞棉塞时，不要移动试管迎接棉塞，以免试管在移动中纳入可能含菌的空气。　　第八，将针头在火焰上烧灼灭菌。放回原处后，腾出手将棉塞塞紧。二、关于微生物酶活性测定，比较复杂，网上比较多，不同酶测定方法也不一样，同学你自己慢慢查吧，O(∩_∩)O哈哈~

并没有特别的方法和步骤，就是简单地将目标菌接种于液体培养基或划种于固体琼脂培养基（保存过久的菌种最好先用液体培养基增菌，因为保存后可能会使细菌丢失一些性状），之后进行培养，培养所获得的培养物即为传代所获得的细菌。严格的话，每传三代应做一次菌种鉴定，以防过程中出现误差而导致菌种错误。

主要是为了繁殖后代。另一个是为了防止菌种特性退化。

首先，从表面上是看不出传代的代数的，所以不要指望从外观或者细菌的生化现象判断传了多少代。但是，每个实验室在进行细菌传代时，都应该具体记录传代的次数和传代后的情况，刚刚获得菌种时也应该记录菌种的情况。所以要知道具体的传代次数，只能从实验室的原始记录获得。

每传代一次菌种变异率提高，所以建议选择冻干粉

【答案】：A真菌的培养方法主要有三种：试管培养是真菌分离培养、传代和保存菌种最常用的方法；玻片培养可用于真菌菌种鉴定；平皿培养只能用于生长繁殖较快的真菌。

芽殖和芽孢

这个应该算一次的。

不用传代直接用的菌种是因为冻干的过程对1代菌种伤害较大。相关实验表明，一般菌种保藏中心的冻干管复苏后，并不推荐1代菌种就保藏或使用，因为冻干的过程对菌种伤害较大，所以一般推荐用2代之后的菌种来保藏或作为工作菌株。微生物菌种1代是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养，任何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。

合理的育种 选育菌种时所处理的细胞应使用单核的，避免使用多核细胞；合理选择诱变剂的种类和剂量或增加突变位点，以减少分离回复；在诱变处理后进行充分的后培养及分离纯化，以保证保藏菌种纯碎。这些可有效的防止菌种的退化。2.选用合适的培养基有人发现用老苜蓿根汁培养基培养“5406”抗生菌—细黄链霉菌可以防止它的退化。在赤霉菌产生菌—藤仓赤霉的培养基中，加入糖蜜、天门冬素、谷氨酰胺、5-核苷酸或甘露醇等物质时，也有防止菌种退化的效果。也有选取营养相对贫乏的培养基做菌种保藏培养基，如培养基中适当限制容易利用的糖源葡萄糖等的添加，因为变异多半是通过菌株的生长繁殖而产生的，当培养基营养丰富时，菌株会处于旺盛的生长状态，代谢水平较高，为变异提供了良好的条件，大大提高了菌株的退化几率。3.创造良好的培养条件 在生产实践中，创造和发现一个适合原种生长的条件可以防止菌种退化，如低温、干燥、缺氧等。在栖土曲霉3．942 的培养中，有人曾用改变培养温度的措施(从20-30℃提高到33-34℃)来防止它产孢子能力的退化。4.控制传代次数由于微生物存在着自发突变，而突变都是在繁殖过程中发生而表现出来的。所以应尽量避免不必要的移种和传代，把必要的传代降低到最低水平，以降低自发突发的机率。菌种传代次数越多，产生突变的几率就越高，因而菌种发生退化的机会就越多。这要求不论在实验室还是在生产实践上，必须严格控制菌种的移种传代次数，并根据菌种保藏方法的不同，确立恰当的移种传代的时间间隔。如同时采用斜面保藏和其它的保藏方式（真空冻干保藏、砂土管、液氮保藏等），以延长菌种保藏时间。5.利用不同类型的细胞进行移种传代在有些微生物中，如放线菌和霉菌，由于其菌的细胞常含有几个核或甚至是异核体，因此用菌丝接种就会出现不纯和衰退，而孢子一般是单核的，用它接种时，就没有这种现象发生。有人在实践中发现构巢曲霉如用分生孢子传代就容易退化，而改用子囊孢子移种传代则不易退化；还有人采用灭过菌的棉团轻巧地沾取“5406”孢子进行斜面移种，由于避免了菌丝的接入，因而达到了防止退化的效果。6.采用有效的菌种保藏方法 用于工业生产的一些微生物菌种，其主要性状都属于数量性状，而这类性状恰是最容易退化的。因此，有必要研究和制定出更有效的菌种保藏方法以防止菌种退化。

菌种退化是客观规律，退化的菌种很难恢复原状。（1）退化原因退化菌种的菌丝在培养基上表现生长很慢，长势弱，稀疏，伸入培养基深层无力，分泌色素差；出耳慢，中途停止发育，子实体形态不一致，大小、厚薄不均，颜色改变，产量低。菌种退化原因主要有以下几方面：①基因变异。遗传特性的表现是基因与环境因子共同作用的结果。当基因往性状差的方向发生变异时，即使环境条件适宜，也必然造成种性退化。②无限继代。制种技术和条件上的差别，只作组织分离、不作出耳鉴定，无限继代、无限制地转管，这些做法都加速了菌种的退化。③营养不良。长期使用单一种类和配方、成分基本相同的培养基，造成营养不能达到生理要求，菌丝生长活力由强变弱，衰老退化。④环境欠佳。菌丝生长发育期环境不良，杂菌污染，也会加速菌种退化。（2）防止措施根据菌种衰老退化的原因，要针对性地采取以下措施：①减少扩接。菌种的退化、种性变异，是在繁殖过程中发生的，可采用控制菌种移接次数来防止。当获得优良菌种后，严格控制转管次数。生产中应减少菌种扩接次数。②防止突变。采用0～4℃低温保藏菌种，有条件时在液氮超低温条件下保藏。③分离复壮。优质菌种，需要经常复壮。每次生产出耳后，应挑选优良子实体，进行组织分离。每年进行一次孢子分离，经出耳鉴定后，选择性状优良的再进行组织分离。总之，有性孢子分离与无性组织分离要交替使用。用有性繁殖来发现好的变异菌株，用组织分离来巩固这些优良菌株的遗传特性。复壮的措施很多，诸如更换培养基、创造适宜环境、防止杂菌污染及避免多品种混合栽培等。

食用菌的遗传稳定性是相对的，其变异性是绝对的，尤其退化性变异的大量存在，往往使一个优良的菌种，衰退转化成为劣质的菌种，这是菌株的遗传物质发生了可遗传变化的结果。虽然食用菌菌种在适宜的环境条件下可以贮藏较长时间，但是，许多常规的保存方法可能会引起菌株衰退，不当的非专业性的设施、设备和技术操作也常引起菌种的退化和老化。在生产中表现为： （1）长速减慢培养期间长速缓慢，特别是在PDA培养基上更加明显。 （2）长速不一继代培养时，个体间长速差异明显，不能同时完成培养。 （3）长相不一其继代培养物长相不完全相同，有的菌丝不舒展、有的菌丝边缘不整齐、有的菌丝干瘪、有的菌丝稀疏、有的气生菌丝变少或变多、有的在气生菌丝的顶端出现黄色色素，有的色素分泌到培养基中等。 （4）似非拮抗现象的出现当在PDA培养基上培养时，出现星星点点的小菌落，这些小菌落不能随菌落的扩展而融为一体，而是两者边缘之间总有都不能逾越的“三八线”，但又不呈现典型的拮抗现象。 （5）其他不良表现长势弱、成活率和产量降低、菇形变小、畸形、商品性降低、抗逆性和抗杂性下降等。 菌种的退化，是在传种继代过程中，从量变到质变的渐变结果，也是一种病态和衰老的综合表现。对于食用菌的同一个种，或者同一个斜面上的菌丝体来说，经移接培养后形成的菌株，在遗传物质上存在着差异，这种差异会因环境与培养条件的不同出现表型上的变化，加之菌丝个体小，生长快，易受理化及生物因素作用的影响，所以容易引起衰退，这种衰退最初是在群体中个体上发生，如不及时发现，采取有效措施，仍继续移接传代，则衰退的个体在群体中的比例会不断增加，从而使整个群体表现出严重的衰退。所以，我们应该一方面用妥善的保藏方法去延缓或遏制菌种迅速老化和变异；另一方面是给予适宜的环境条件，恢复原来的生活力和优良种性，达到复壮目的。采取下列措施，有助于延缓菌种的退化。 ①要防止菌种混杂 在选留种菇，进行出菇试验等工作中，均应加强品种隔离，减少品种间的天然杂交，以保证优良品种的遗传组成在较长时间内能保持稳定。 ②加强菌种保藏工作，并适当控制传代次数 传代是一个微生物技术术语，把培养物接种到新的培养基上，以保持该微生物原有性状和旺盛活性的操作叫传代。传代次数是否引起食用菌退化是一个复杂的问题，在微生物工业中，一些优质菌菌种在三代以后的孢子即表现出明显退化；而食用菌的情况不完全相同，次生菌丝从斜面到斜面是传代，属于无性繁殖，稳定性强，由于操作和外界条件的影响，有时产生变异，传代次数多，引起基因突变和发生衰退的几率就越高。所以在生产中，引进或分离纯化得到一个优良品种后，不要立即将该原始种全部用完，而应将其妥善保藏。菌种的传代次数一般不要超过6代。 ③警惕菌种可能遭受病毒的感染 确证已感染病毒的，尤其是病毒粒子含量大，菌丝体及子实体性状已受到严重影响的菌种，应及时淘汰。病毒感染程度轻的，可以进行脱毒。据许襄中（1994）初步研究，采用挑取尖端菌丝（取染毒菌落尖端3～4毫米幼嫩菌丝）及高温培养（32～34℃）相结合的方法，有一定脱毒效果。关于人工脱毒技术的开发及效果评价，值得进一步研究。 ④创造菌种生长的良好营养条件和生活环境 适宜的菌种培养基，能使菌种生长健壮，减少衰退，营养不足和过于丰富都会加快菌种衰退速度。 ⑤经常改变培养基的配方成分 在菌种传代保藏过程中，切忌连续使用某一培养基固定配方，这也是防止菌种衰退的一项重要措施。 以上措施无疑都有助于延缓菌种退化的步伐。但是，由于造成退化的因素具有相当程度的普遍性和随机性，因此，任何一个优良菌种都不可能一劳永逸地永远保持优良性状。适时对菌种进行更新换代始终是实现高产稳产的一项根本措施。总的看来，我国常见栽培食用菌菌种的更新换代工作还赶不上生产迅速发展的需要，今后应进一步加强这项工作。

酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光滑，比细菌的菌落大而厚。菌落特征比较：细菌：湿润，粘稠，易挑起。放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素。霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽。菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等。每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征。不同种或同种在不同的培养条件下，菌落特征是不同的。这些特征对菌种识别、鉴定有一定意义。菌落（colony）是由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落。扩展资料：菌种培养基可通过影响菌种的生理状况而影响发酵产量。菌种培养基营养过于丰富不利于孢子形成，因而影响发酵。菌种培养基营养贫乏也同样不利于发酵。因为菌种在营养贫乏的培养基中多次传代，会使菌体细胞内缺乏某些生长因子而衰老甚至死亡。自然选育或菌种培养所用的培养基应选择具有菌种传代后生产能力下降不明显、菌体不易衰老和自溶的正常形态菌落、孢子丰富的培养基。菌种的遗传特性需要在一定条件下才能表现出来。由于培养条件不适当，使菌种处于不利于发酵生产的生理状况，其结果也表现为菌种衰退。菌参考资料来源：百度百科-酵母

选用合适的培养基（北纳生物）有人发现用老苜蓿根汁培养基培养"5406"抗生菌--细黄链霉菌可以防止它的退化。在赤霉菌产生菌--藤仓赤霉的培养基中，加入糖蜜、天门冬素、谷氨酰胺、5-核苷酸或甘露醇等物质时，也有防止菌种退化的效果。也有选取营养相对贫乏的培养基做菌种保藏培养基，如培养基中适当限制容易利用的糖源葡萄糖等的添加，因为变异多半是通过菌株的生长繁殖而产生的，当培养基营养丰富时，菌株会处于旺盛的生长状态，代谢水平较高，为变异提供了良好的条件，大大提高了菌株的退化几率。创造良好的培养条件在生产实践中，创造和发现一个适合原种生长的条件可以防止菌种退化，如低温、干燥、缺氧等。在栖土曲霉3.942的培养中，有人曾用改变培养温度的措施(从20-30℃提高到33-34℃)来防止它产孢子能力的退化。控制传代次数由于微生物存在着自发突变，而突变都是在繁殖过程中发生而表现出来的。所以应尽量避免不必要的移种和传代，把必要的传代降低到最低水平，以降低自发突发的机率。菌种传代次数越多，产生突变的几率就越高，因而菌种发生退化的机会就越多。这要求不论在实验室还是在生产实践上，必须严格控制菌种的移种传代次数，并根据菌种保藏方法的不同，确立恰当的移种传代的时间间隔。如同时采用斜面保藏和其它的保藏方式(真空冻干保藏、砂土管、液氮保藏等)，以延长菌种保藏时间。利用不同类型的细胞进行移种传代在有些微生物中，如放线菌和霉菌，由于其菌的细胞常含有几个核或甚至是异核体，因此用菌丝接种就会出现不纯和衰退，而孢子一般是单核的，用它接种时，就没有这种现象发生。有人在实践中发现构巢曲霉如用分生孢子传代就容易退化，而改用子囊孢子移种传代则不易退化;还有人采用灭过菌的棉团轻巧地沾取"5406"孢子进行斜面移种，由于避免了菌丝的接入，因而达到了防止退化的效果。

首先表面看传代代数所要指望外观或者细菌化现象判断传少代每实验室进行细菌传代都应该具体记录传代数传代情况刚刚获菌种应该记录菌种情况所要知道具体传代