右佐匹克隆片的药理毒理

微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。最常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。以受试物处理啮齿类动物，然后处死，取骨髓，制片、固定、染色，于显微镜下计数PCE中的微核。如果与对照组比较，处理组PCE微核率有统计学意义的增加，并有剂量-反应关系，则可认为该受试物是哺乳动物体细胞的致突变物。人外周淋巴细胞微核试验，可用于接触环境致突变物的人群的监测和危险性评价中文名微核试验类别遗传毒性试验方法应用评价药物对人体细胞损伤技术种类常规微核试验微核试验的应用与方法微核试验的目的与意义微核试验发展的历史微核试验的方法TA说微核试验的应用与方法用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。若采用核型稳定的细胞,确立统一的操作协议,进行实验室间的合作建立数据库,应用探针技术的微核试验很可能被纳入遗传毒理学试验。微核试验技术的种类很多，包括常规微核试验、细胞分裂阻滞微核分析法、荧光原位杂交试验与DNA探针与抗着丝粒抗体染色等方法。微核试验的目的与意义在化学物质中，有很多能引起染色体的异常。染色体是遗传物质的载体并含有生物体全部的遗传信息，染色体遗传信息的异常可不同程度地影响生物机体的生存。轻者突变，重者死亡。同样，对人类就会引起各种疾病和损害。对肿瘤细胞的详细研究表明，大多数肿瘤细胞都存在染色体异常。此外，先天性染色体异常可引起多种遗传性疾病。如：21号染色体三体就可引起唐纳氏综合征(先天愚 型)，而5号染色体短臂部分缺失(5P一)引起猫叫综合征。因此，染色体仅出现微小的异常变化，都可能对人体健康产生非常严重的影响。化学物质能否诱发染色体异常?有许多种评价方法。但最常用的是：直接观察染色体异常(染色体中期相分析，chromosomal analysis，简称cA)和检测由于染色体丢失或断片形成而出现的微核(微核试验，micronucleus test，简称MNT)。MNT是公认的检测染色体异常的简便方法。特别是应用小鼠骨髓红细胞微核(micronuclei，简称MN)检测方法，已成为一种能获得大量客观数据的化学物质遗传毒性评价体系。微核试验发展的历史回顾MNT的发展史，不能不提及19世纪末Howell与Jolly等的贡献。Howell与Jolly分别在猫和大鼠外周血中发现一种小体，命名 为Howell-Jolly小体，并且发现这种小体也存在于恶性贫血患者外周血中。这一小体便是MNT中所见的被称之为微核(MN)的小体。1959年Evans等将蚕豆(V/c/a o)根端细胞暴露于电离辐射，观察到辐射诱导MN形成效应，并据此间接推断MN来源于辐射诱导的染色体异常。这篇文献便是以MN发生率反映染色体异常来评价遗传毒性的第一篇报道。作者认为约60%染色体断片与MN形 成直接相关。1970年Boiler和Sehmid用中国金黄地鼠观察了抗肿瘤药三亚胺~(triaziquone，Temimon)给予后骨髓与外周血细胞学的变化。并且提出用本来无核的外周血嗜多染红细胞中MN发生率来作为微核试验的基本指标，并正式命名为MNT。此后至70年代中期，Sehmid以及Heddle研究小组的工作，全面奠定了MNT的理论及应用基础。微核试验的方法1、动物体内细胞微核：主要有骨髓嗜多染红细胞微核试验；外周血淋巴细胞微核试验。2、细胞培养微核试验；3、蚕豆根尖微核试验：实验所用的蚕豆为松滋青皮豆，通过浸种、催芽、染毒、恢复培养、固定、孚尔根染色等步骤后，进行镜检。[1]

影响微核试验结果的因素有样品的类型、样品的质量、样品的量、样品的存储、样品的处理、实验条件。1、样品的类型：不同的样品类型会影响微核试验的结果。比如，植物细胞和动物细胞的结果会有所不同。2、样品的质量：样品的质量会影响微核试验的结果，比如，样品的活性和纯度等。3、样品的量：样品的量也会影响微核试验的结果，比如，样品的量越多，结果会更准确。4、样品的存储：样品的存储方式也会影响微核试验的结果，比如，样品的温度和湿度等。5、样品的处理：样品的处理方式也会影响微核试验的结果，比如，样品的抗原提取和抗体检测等。6、实验条件：实验条件也会影响微核试验的结果，比如，实验的温度、湿度、pH值等。

为什么采用根尖细胞进行微核试验答：1. 蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleustest,MC-NT)技术是一种 以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核检测方法。它是一 种应用于监测环境致突变物2. 关键词 蚕豆根尖 微核 洗发水 千分率 蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。它的染色体为六对相当 大的染色体,而且根尖含有较多的分裂相细胞,3. 1. 实验目的 掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。并利用蚕豆根尖细 胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价,同时表明蚕豆 根尖细胞ue63c

【答案】：C微核试验是观察受试物能否产生微核的试验，主要可检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂，其灵敏度与细胞遗传学试验基本相同，但观察技术简易而省时。故选C项。

　　微核检测指数不可表明是否受辐射伤害。　　　　微核试验在对外来化合物(如药品、食品添加剂、农药、化妆品、环境污染物等)遗传毒性和职业暴露人群遗传损害监测和现场生态环境检测方面，在诊断和预防肝癌、食管癌、肺癌等恶性肿瘤方面得到了大量的应用。微核试验最大的优点是经济、简单、快速，而国内外大量的对试验研究，比较一致的看法是该方法在敏感性、特异性和准确性方面，与经典的染色体畸变分析方法基本相当川。因而，特别适合作为大量化合物和现场人群初筛的实验方法。微核试验创建于20世纪70年代中期(1973~1975)，目前许多国家和国际组织，已将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等毒理安全性评价的必做实验。

1. 微核率表征的是受试物是否为染色体断裂剂或部分非整倍体致突变剂，当然得和阴性比较，采用统计学方法分析是否有显著差异。2. PCE/NCE是指嗜多染红细胞与正常红细胞的比值，其比值比较宽泛，从0.6-2.6 不等（这个范围不是绝对的），算是正常，说明受试物不会产生细胞毒性（或者说测试浓度下的受试物不会产生细胞毒性），但如果<0.1 则说明PCE的产生受到抑制，<0.05 则受试物剂量过大，实验结果不可靠，需调整试验浓度。个人认为，有条件的实验室，完全可以先行进行细胞毒性的试验，并用试验结果来指导微核试验的浓度设计。说实话，微核试验的最终评判点是微核率，PCE/NCE仅是参考，波动较大，最好不要确定所谓的正常值。

微核实验在环境评价中的意义是用于接触环境致突变物的人群的监测和危险性评价。微核检测技术是一项实用而有效的试验技术，主要应用于环境检测领域。

真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式，游离于主核之外，大小应在主核三分之一到二十分之一。用一定浓度的待测物培养液来培养蚕豆根尖，另外以蒸馏水培养蚕豆根尖做对照。然后用根尖分生区分别做装片，观察各装片的细胞，计算微核率微核率（MCN‰）=某测试样点（或对照组）观察到的MCN数／某测试样点（或对照组）观察到的细胞数×1000‰。扩展资料：无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。最常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。以受试物处理啮齿类动物，然后处死，取骨髓，制片、固定、染色，于显微镜下计数PCE中的微核。细胞壁为植物细胞特有的结构，具有保护原生质体、维持细胞一定形状的作用。细胞壁可分为胞间层、初生壁和次生壁。胞间层为相邻的细胞所共有；初生壁位于胞间层的内侧，是细胞生长过程中所产生的；次生壁在细胞停止增大后而形成，附于初生壁的内方，有些细胞不具次生壁。次生壁形成过程中，未增厚的部分成为纹孔。纹孔分为单纹孔和具缘纹孔两种类型。高等植物细胞之间有许多细胞质丝通过细胞壁，形成胞间连丝，使相邻细胞原生质体连成统一的整体，在细胞间起着运输物质与传递刺激的作用。参考资料来源：百度百科--微核试验参考资料来源：百度百科--植物细胞参考资料来源：百度百科--真核细胞

目的意义不一样。染色体制备实验的目的意义是掌握染色体标本制作的根本方法，认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图，微核试验的目的意义是是研究某些化学物品对人体细胞造成的影响，先天性染色体异常可引起多种遗传性疾病。微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。

样品的类型和实验条件等。1、样品的类型:不同的样品类型可能会影响微核试验的结果,例如,植物细胞和动物细胞的结果可能会有所不同。2、实验条件：实验条件也会影响微核试验的结果，例如，实验的温度、湿度、pH值等。

1、动物体内细胞微核：主要有骨髓嗜多染红细胞微核试验；外周血淋巴细胞微核试验。2、细胞培养微核试验；3、蚕豆根尖微核试验：实验所用的蚕豆为松滋青皮豆，通过浸种、催芽、染毒、恢复培养、固定、孚尔根染色等步骤后，进行镜检。

微核试验是检测外来化合物对染色体损伤作用的遗传毒理学方法，指示染色体或纺锤体的损伤。致突变试验通常观察的是小鼠红细胞，红细胞在成熟过程中将细胞核排出，成为无核细胞，而微核却留在细胞质中不被排出。这样，只要红细胞生成过程中出现过染色体断片，就能在成熟的红细胞内看到微核，成为反映了遗传突变的一个指针。

近年来，随着分子生物学技术的迅速发展和渗透到微核研究中，大大拓展了微核试验的检测和应用范围，已发展成为能同时检测染色体断裂、丢失、分裂延迟、分裂不平衡、基因扩增、不分离、DNA损伤修复障碍、HPrt基因突变、凋亡、细胞分裂不平衡等多种遗传学终点的检测，因而近年来国际上有人提出了新微核试验(newmi一cronucleustest)概念，从而大大拓展了微核试验的应用范围。当然，要实现一个实验多个遗传损害终点的检测，需要更多的新的技术手段配合，如FISH技术、图象分析卜技术等等，这也对我国的实验室条件和研究水平提出了更高的要求。

由于染色体丢失或断片形成而出现的微核，在化学物质中，有很多能引起染色体的异常。染色体是遗传物质的载体并含有生物体全部的遗传信息，染色体遗传信息的异常可不同程度地影响生物机体的生存。轻者突变，重者死亡。同样，对人类就会引起各种疾病和损害。对肿瘤细胞的详细研究表明，大多数肿瘤细胞都存在染色体异常。此外，先天性染色体异常可引起多种遗传性疾病。扩展资料在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。参考资料来源：百度百科-微核参考资料来源：百度百科-微核试验

回顾MNT的发展史，不能不提及19世纪末Howell与Jolly等的贡献。Howell与Jolly分别在猫和大鼠外周血中发现一种小体，命名 为Howell-Jolly小体，并且发现这种小体也存在于恶性贫血患者外周血中。这一小体便是今日MNT中所见的被称之为微核(MN)的小体。1959年Evans等将蚕豆(V/c/a o)根端细胞暴露于电离辐射，观察到辐射诱导MN形成效应，并据此间接推断MN来源于辐射诱导的染色体异常。这篇文献便是以MN发生率反映染色体异常来评价遗传毒性的第一篇报道。作者认为约60%染色体断片与MN形 成直接相关。1970年Boiler和Sehmid用中国金黄地鼠观察了抗肿瘤药三亚胺~(triaziquone，Temimon)给予后骨髓与外周血细胞学的变化。并且提出用本来无核的外周血嗜多染红细胞中MN发生率来作为微核试验的基本指标，并正式命名为MNT。此后至70年代中期，Sehmid以及Heddle研究小组的工作，全面奠定了MNT的理论及应用基础。

【答案】：BAmes试验即鼠伤寒沙门菌回复突变试验。该试验以鼠伤寒沙门菌的组氨酸营养缺陷型菌株为指示生物，这些菌株的组氨酸操纵子发生了基因点突变，丧失了合成组氨酸的能力，突变型菌株的自发回变率都很低，但容易被各种致突变因素诱导，回复突变为野生型，即恢复了合成组氨酸的能力，在不含组氨酸的选择培养基上可以生长成可见的菌落。根据选择培养基上回变菌落数显著地超过了自发回变数，即可判定受试物为鼠伤寒沙门菌的致突变物。微核试验（MNT）：物种为哺乳动物，靶细胞为体、性细胞，体内/体外实验都可以，遗传学重点为染色体畸变、非整倍体。染色体畸变试验：物种为哺乳动物，靶细胞为体、性细胞，体内/体外实验都可以，遗传学重点为染色体畸变。小鼠睾丸细胞染色体畸变试验，属于染色体畸变试验的一种，它是以小鼠为实验动物，为体内试验，观察其性细胞内染色体的改变。显性致死试验：物种为哺乳动物，靶细胞为性细胞，进行体内实验，遗传学终点为染色体畸变。哺乳动物细胞基因突变试验：靶细胞为体细胞，属于体外实验，遗传学终点为基因突变。

Ames实验目的和原理鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）的组氨酸营养缺陷型（his－）菌株，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一般只能分裂几次，形成在显微镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作用后，大量细胞发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。某些化学物质需经代谢活化才有致变作用，在测试系统中加入哺乳动物微粒体酶，可弥补体外试验缺乏代谢活化系统之不足。鉴于化学物质的致突变作用与致癌作用之间密切相关，故此法现广泛应用于致癌物的筛选

该外源化合物基本无毒害作用

核试验的词语有：持戈试马，简约详核，驰马试剑。核试验的词语有：经验主义，驰马试剑，事核言直。2：注音是、ㄏㄜ_ㄕ_一ㄢ_。3：拼音是、héshìyàn。4：结构是、核(左右结构)试(左右结构)验(左右结构)。核试验的具体解释是什么呢，我们通过以下几个方面为您介绍：一、词语解释【点此查看计划详细内容】核试验héshìyàn。(1)指核武器的试验。二、网络解释核试验核试验，为了军事研究和科学研究目的在预定条件下进行的核爆炸装置或核武器爆炸试验。其主要目的是：鉴定核爆炸装置的威力及其他性能，验证理论计算和结构设计是否合理，为改进核武器设计或定型生产提供依据；在核爆炸环境下研究核爆炸现象学和各种杀伤破坏因素的变化规律；研究核爆炸的和平利用等。它是一项规模很大、需要多学科、多部门协同配合和耗费大量人力、物力的科学试验，人类的第一次核试验是在美国新墨西哥州的洛斯阿拉莫斯洛斯阿拉莫斯国家实验室完成的。关于核试验的成语综核名实卖李钻核屡试屡验危言核论循名核实发硎新试关于核试验的造句1、此次核试验中还采用了双轴针孔照像技术，标志着我国的核试验测试诊断达到了国际先进水平。2、应用小鼠骨髓微核试验及小鼠睾丸染色体畸变试验，测试蜂胶对诱变剂诱发的染色体损伤的保护作用。3、这件事是真的，那个人的确是能量级第五层的武者，我在阿巴坎核试验区和他激斗过!4、奥本海默说了举世闻名的一句话，他说，这场核试验让他目睹了令人难以置信的残忍景象，由此他联想到印度佛经里的语句，在薄伽梵歌曰：“现在我变成了死神，世界的毁灭者。”。5、此番的导弹试射与地下核试验可视为第五个回合，是朝鲜核、导角逐战略“以攻为守”的转换。点此查看更多关于核试验的详细信息

【答案】：E此题考查考生对遗传毒理学原理和遗传学终点的理解。遗传学终点可分为基因突变、染色体畸变、染色体组畸变（非整倍体）及DNA原发损伤。题干所列各试验的终点，微核试验为染色体畸变（非整倍体）；显性致死试验为生殖细胞染色体畸变；细菌回复突变试验为基因突变；骨髓染色体畸变试验为体细胞染色体畸变；程序外DNA合成试验为原发性DNA损伤。

【答案】：E本题为基本知识题，考核致突变试验检测终点。在本题答案中，微核试验的检测终点为体细胞染色体畸变，彗星试验和显性致死试验的检测终点均为原发性DNA损伤，果蝇伴性隐性致死试验的检测终点为生殖细胞基因突变，只有显性致死试验的检测终点为生殖细胞染色体畸变。因此，正确答案为E。

1、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验 又称Ames试验，检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力。试验菌株都有组氨酸突变(his-)，不能自行合成组氨酸，在不含组氨酸的最低营养平皿上不能生长，回复突变成野生型后能自行合成组氨酸，可在最低营养平皿上生长成可见菌落。计数最低营养平皿上的回变菌落数来判定受试物是否有致突变性。标准试验菌株有四种：TA97和TA98检测移码突变、TA100检测硷基置换突变、TA102对醛、过氧化物及DNA交联剂较敏感。这四个试验菌株除了含有his-突变，还有一些附加突变，以提高敏感性。 试验方法有点试验(预试验)和掺入试验(标准试验)两种。在掺入试验中，受试物最高剂量为5mg/皿或出现毒性及沉降的剂量，至少有五个剂量点，并有阴性(溶剂)对照和阳性对照。将受试物、试验菌株培养物和S9混合液加到顶层培养基中，混匀后铺在最低营养平皿上，37℃培养48小时，计数可见菌落数。判断阳性结果的标准是，如每皿回变菌落数为阴性对照的每皿回变菌落数的两倍以上，并有剂量－反应关系，即认为此受试物为鼠伤寒沙门氏菌的致突变物。 S9混合液是用多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆9000Xg上清液(S9)加上NADP及葡萄糖－6－磷酸等辅助因子，作为代谢活化系统。如不加S9混合液得到阳性结果，说明受试物是直接致突变物；加S9混合液才得到阳性结果，说明该受试物是间接致突变物。只要在一种试验菌株得到阳性结果，即认为受试物是致突变物；仅当四种试验菌株均得到阴性结果，才认为受试物是非致突变物。 2、哺乳动物细胞基因突变试验 野生型与突变型果蝇的体色哺乳动物体外培养细胞的基因正向突变试验常用的测试系统有小鼠淋巴瘤L5178Y细胞，中国仓鼠肺V79细胞和卵巢CHO细胞的三个基因位点的突变，即次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)、胸苷激酶(TK)及Na+/K+ATP酶(OUA)位点。HGRPT和Na+/K+ATP酶位点突变可用于上述三种细胞，OUA位点突变仅适用于CHO细胞，HGRPT和TK可分别使6－硫代鸟嘌呤(6－TG)转移上磷酸核糖及使5－溴脱氧尿苷磷酰化，它们的代谢产物可掺入DNA引起细胞死亡，因此正常细胞在含有这些硷基类似物的培养基中不能生长，在致突变物作用下此两个位点发生突变的细胞对这些硷基类似物具有抗药性，可以增殖成为克隆(细胞集落)。Na+/K+ATP酶是细胞膜上的Na+/K泵，鸟本苷可抑制此酶活性引起细胞死亡，当致突变物引起该位点突变后，Na+/K+ATP酶对鸟本苷的亲和力下降，而酶活性不变，故对培养基中的鸟本苷产生抗药性，并可增殖为克隆。 1、染色体分析 观察染色体形态结构和数目改变称为染色体分析。在国外常称为细胞遗传学检验，但这一名称有时广义地包括微核试验和SCE试验，因为这两个试验同样也是在显微镜下观察细胞染色体的改变。 对于结构畸变，一般只观察到裂隙、断裂、断片、微小体、染色体环、粉碎、双或多着丝粒染色体和射体。对于缺失，除染色单体缺失外，需作核型分析。即染色体摄影拍片后，再排列进行细微观察或用电子计算机进行图象分析。对于相互易位，除生殖细胞非同源性染色体相互易位外，倒位、插入、重复等均需显带染色才能发现。 对于数目畸变，需在染毒后经过一次有丝分裂才能发现。但是经过一次有丝分裂后，一些结构畸变可能因遗传物质的丢失而致细胞死亡，因此不能发现。所以应安排多次收获时间，以便分别检查断裂剂的作用。收获时间的安排还应考虑外来化合物可能在细胞周期的不同时期产生作用，以及延长细胞周期的作用。 体细胞的染色体分析可作体内或体外试验，体内试验多观察骨髓细胞，体外试验常用中国仓鼠肺细胞(CHL)，以及中国仓鼠卵细胞(CHO)和V79等细胞系，但任何细胞系的染色体皆不稳定，不能准确地观察非整倍体，故在体外试验中，如考虑进行染色体数目观察，应当使用原代或早代细胞，例如人外周淋巴细胞。体内试验与人体实际接触情况相似，但应注意受试物或其活性代谢产物有可能不易在骨髓中达到足够的浓度。体外试验由于受试物与细胞直接接触，故往往比体内试验灵敏。 2、微核试验 微核试验经致突变物作用后，染色体无着丝点断片或因纺锤体受损伤而丢失的整个染色体在细胞分裂的后期仍留在子细胞的胞质内，成为一个或几个规则的次核，称为微核。常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。PCE是红细胞成熟的一个阶段，此时红细胞的主核已排出，微核容易辩认，PCE胞质含RNA染色与成熟红细胞易于区别，故为骨髓微核试验的首选细胞群。常用小鼠，至少设两个处理组，最高剂量为LD50/7的80%(LD50/7为在7天内使半数动物死亡的剂量)，另一组为LD50/7的40%，灌胃或腹腔注射，同时设阴性和阳性对照组，每组至少8只动物，雌雄各半。给毒方案有多种，如连续四天，每天一次。第五天处死，取骨髓，涂片，固定，染色。每鼠计数1,000个PCE的微核出现率。当经适当的统计学分析，处理组微核率显著高于阴性对照组，并呈现剂量－反应关系时，可认为受试物对该试验动物的骨髓细胞有致染色体损伤的作用。 1.姐妹染色单体交换(SCE)试验 SCE是染色体同源座位上DNA复制产物的相互交换，SCE可能与DNA的断裂和重接有关，提示DNA损伤。SCE试验可分为体外试验、体内试验和体内、体外结合试验。体外SCE试验可采用贴壁生长的细胞，如CHO、V79、CHL等，也可用悬浮生长的细胞，如人外周血淋巴细胞。细胞在含5-溴脱氧尿苷(BrdU)的培养液中生长两个周期。由于Brdu是嘧啶类似物，可于合成期中掺入DNA互补链，所以在下一个中期所见染色体姐妹染色单体之间各有一条互补链掺入了Brdu，于是Brdu对称姐妹染色单体造成同等的干扰，其染色并无区别。但到了第二个周期中期相，每个染色体中只有一条染色单体保留了原来不带Brdu的模板链，而另一条染色单体则是上一周期带Brdu的互补链成为模板链。于是经两个周期的Brdu掺入互补链可使两姐妹染色单体所含Brdu量不相等，从而出现染色差别。如果Brdu仅在第1周期掺入，第2周期不掺入，则第2中期相似可见姐妹染色单体染色有差别。如果DNA单链发生了断裂，而且在修复过程中发生重排，就在第2周期可见姐妹染色单体同位节段的相互交换。经差别染色后，可观察到两条明暗不同的染色单体。若两条染色单体间发生等位交换，可根据每条染色单体内出现深浅不同的染色片段进行识别和计数。 2.程序外DNA合成试验 基本方法是测定S期以外3H-胸苷掺入胞核的量，这一掺入量可反映DNA损伤后修复合成的量。由于此种合成发生在DNA正常复制合成主要时期以外，故称为程序外DNA合成(unschedule DNA synthesis UDS)试验或DNA修复合成试验。一般使用人淋巴细胞或啮齿动物肝细胞等不处于正在增殖的细胞较为方便，否则就需要人为地将细胞阻断于G1期，使增殖同步化。然后在药物的抑制下使残存的半保留DNA复制降低到最低限度，才能避免掺入水平很高的半保留复制对掺入水平很低的程序外DNA合成的观察。试验结果的评定 各种致突变试验都有其特定的观察终点，但实验结束后都面临一个共同的问题，即所取得的数据表示阳性结果或表示阴性结果。 在评定阳性或阴性之前，应首先检查实验的质量控制情况。致突变试验的质量控制是通过：①盲法观察和②阴性对照和阳性对照的设立。盲法观察是观察人员不了解所观察的标本的染毒剂量或组别，可免除观察人员对实验数据产生主观影响。阴性对照指不加受试物的空白对照，有时则是加入为了溶解受试物所用溶剂的溶剂对照。阳性对照是加入已知突变物的对照，对于体外试验应包括需活化的和不需活化的两种已知致突变物。空白对照应和溶剂对照的结果一致，如有显著差异则可能表明有实验误差，如溶剂对照结果显著高于空白对照则可能溶剂具有致突变性。阴性对照和阳性对照结果都应与文献报告或本实验室的历史资料一致。如差异较大也说明可能有实验误差。发现这些质量控制指标存在任何疑问时，均应查清存在的问题，并加以解决后，重新进行实验。 阳性结果应当具有剂量反应关系，即剂量越高，致突变效果越大，并在一组或多组的观察值与阴性对照之间有显著差异。如果低剂量组或低、中两剂量组与对照组之间的差异有显著性，而高剂量组差异无显著性，则阳性结果不可信或无意义。此时应检查影响实验的因素，在排除影响因素后，应考虑是否为剂量反应关系曲线的特殊形式所致，即曲线上升至一定程度后下降。如怀疑及此，应当在零剂量与最高观察值的剂量之间重新设计染毒剂量。 阴性结果的判定条件是：①最高剂量应包括受试物溶解度许可或灌胃量许可的最大剂量。如该剂量毒性很大，则体内试验和细菌试验应为最大耐受量，使用哺乳动物细胞进行体外试验，常选LD50或LD80为最大剂量。溶解度大，毒性低的化学物，在细菌试验中往往以5mg/皿作为最高剂量。②各剂量的组间差距不应过大，以防漏检仅在非常狭窄范围内才有突变能力的某些外来化合物。 无论阳性还是阴性结果都要求有重现性，即重复试验能得到相同结果。

不注射生理盐水该实验设计就不合理，因为对照组需要正常的注射对老鼠无害无益的等量物质，这就是生理盐水而不是清水

【答案】：A遗传病理学试验中，检测基因突变的试验有：Ames试验、哺乳动物细胞基因突变试验、果蝇伴性隐形致死试验；检测染色体畸变的试验有：染色体畸变试验、微核试验、显性致死试验：检测DNA损伤的试验有：姐妹染色单体交换试验、程序外DNA合成(UDS)试验，所以正确答案为A。

化妆品安全性评价就是通过对化妆品毒理学检测即通过动物实验阐明化妆品新原料或新产品的毒性及其潜在危害，来对化妆品的安全性作出评价，保障化妆品的安全。以下是对化妆品安全性评价标准及毒理性检测项目的汇总。化妆品安全性评价标准为GB 7919-87，适用于在我国生产和销售的一切化妆品原料和化妆品产品。化妆品安全性评价的五个阶段程序如下：第一阶段：急性毒性和动物皮肤、粘膜试验第二阶段：亚慢性毒性和致畸试验第三阶段：致突变、致癌短期生物筛选试验第四阶段：慢性毒性和致癌试验第五阶段：人体激发斑贴试验和试用试验化妆品安全性评价的标准规定如下：凡属于化妆品新原料,必须进行五个阶段的试验。凡属于含药物化妆品必须进行动物急性毒性试验、皮肤与粘膜试验和人体试验，但是根据化妆品所含成分的性质、使用方式和使用部位等因素,可分别选择其中几项甚至全部试验项目。凡属于化妆品新产品必须进行动物急性毒性试验、皮肤与粘膜试验和人体试验，但是根据化妆品所含成分的性质.使用方式和使用部位等因素,可分别选择其中几项甚至全部试验项目。凡进口化妆品应由进口单位提供安全性评价资料。化妆品安全性评价试验方法：急性皮肤毒性试验急性经口毒性试验皮肤剌激试验眼刺激试验皮肤变态反应试验皮肤光毒和光变态反应试验人体激发斑贴试验和试用试验亚慢性皮肤毒性试验亚慢性经口毒性试验致畸试验慢性毒性试验致癌试验

微核指数不超过千分之三十就为正常。人外周血淋巴细胞大都处于细胞周期的G0期，在含有PHA的培养基中进行体外培养后，原来处于G0期的淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，恢复分裂能力。在细胞分裂过程中，由于化学物质或辐射作用影响，可以引起淋巴母细胞染色体损伤，致使染色体断裂，无着丝粒的染色体断片不能随染色体移动进入子细胞核，结果在细胞质中形成微核。本试验是一种体外测试有害因子遗传毒性的方法，通过在人类外周血淋巴细胞体外培养过程中加入受试物，检测细胞微核情况来评价受试物的遗传毒性。同时也成为检测致突变、致癌、致畸物质对机体遗传效应的一种重要手段。

近十几年,随着遗传毒理学相关领域特别是分子生物学的研究进展,遗传毒性测试评价方法也在不断改进。据报道,目前已建立的遗传毒性短期检测法已超过200种。根据其检测的遗传学终点可分为4种类型:1检测基因突变;2检测染色体畸变;3检测染色体组畸变;4检测DNA原始损伤。1　现行组合试验方案由于一种遗传毒性检测方法通常只能反映一个或两个遗传学终点。没有一种检测方法能涵盖所有的遗传学终点,故需用一组试验配套进行试验。200多种检测方法中,真正经过验证有合适灵敏度和特异度的大概不到10种。目前多数国家规定,如体内诱变试验显示1个或以上试验呈阳性结果,则需要进行生殖细胞遗传毒性测试。2　各类遗传毒性试验方法的研究进展2.1　检测基因突变遗传毒性试验2.1.1　Ames试验　Ames试验是检测化学物质基因突变的常用方法。常规的Ames试验选用四个测试菌株(TA97、TA98、TA100、TA102),最近有人提出增加TA1535测试菌株,该菌株特别适用于检测混合物的致突变性。目前出现的新生菌株具有更高的敏感性和特异性,如YG7014、TG7108,缺乏编码O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基化转移酶的ogtST基因,专用于对烷化剂引起的DNA损伤检测;引入乙酰转移酶基因的YG1024、YG1029菌株,对硝基芳烃和芳香胺的敏感性比原菌株高100倍以上[4]。测试代谢活化系统一般采用由Aro-clor1254(PCBs)诱导大鼠肝微粒体酶的S9;国外也有用人肝S9的报道,试验证明其代谢活性明显高于鼠S9[5,6]。为了克服S9制备上的困难和不稳定性,Josephy等将沙门氏菌的芳香胺N-乙酰转移酶基因和人类细胞色素P-450基因Cyp1A2引入细胞,构建了在无外源S9时也可检出芳香胺诱变性的Ames测试菌株如DJ4501A2[7]。2.1.2　TK基因突变试验　TK基因突变试验是一种哺乳动物体细胞基因正向突变试验,近年来其应用价值有明显的提高。TK基因编码胸苷激酶,该酶催化胸苷的磷酸化反应,生成胸苷单磷酸(TMP)。如果存在三氟苷(TFT)等嘧啶类似物,则产生异常的TMP,掺入DNA中导致细胞死亡。如受检物能引起TK基因突变,胸苷激酶则不能合成,而在核苷类似物的存在下能够存活。TK基因突变试验可检出包括点突变、大的缺失、重组、染色体异倍性和其他较大范围基因组改变在内的多种遗传改变。试验采用的靶细胞系主要有小鼠淋巴瘤细胞L5178Y以及人类淋巴母细胞TK6和WTK1等。其基因型均为tk+/-。Honma(本间正充)和张立实(1999)指出原用染毒时间3～6h对于充分检出断裂剂和锤体来说这个时间太短,获阴性结果时应延长至24h。据资料显示对于同一阳性受检物,WTK1细胞的突变频率远高于TK6细胞,认为与WTK1存在p53基因突变有关。Do-brovolsky(1999)建立了tk+/-转基因小鼠,可用于体内试验。2.1.3　转基因小鼠基因突变试验　转基因小鼠基因突变试验可在整体状态下检测基因突变,比较不同组织(包括生殖腺)的突变率,确定靶器官,对诱发的遗传改变作精确分析等[8]。1989年Gossen等报道了LacZ转基因小鼠突变测试系统。近年来,国外已陆续发展了多种用于突变检测的转基因动物,其中3种已投入商品化生产,MutaTM小鼠、Big-BlueTM小鼠和Xenomouse小鼠,它们分别采用大肠杆菌乳糖操纵子的LacZ和/或Lacl作为诱变的靶基因。陈建泉等人(1997)已经以穿梭质粒pESnx载体,以xy1E基因因为诱变靶基因建立了携带xy1E的转基因小鼠,并对转基因小鼠进行了繁殖建系。并已实验证明xy1E转基因小鼠是一个研究体内基因突变的有效模型,它可望成为一种新的转基因小鼠突变检测系统[9]。Heddle等(2000)建立了1个种gptdelta转基因小鼠。HiroyukiHayashi等(2003)将载有E.coligpt基因和λ噬菌体的red/gam基因λEG10DNA整合到SD大鼠每个单倍体基因组q24～q31位点。这种转基因大鼠对乙基亚硝基脲(ENU)和苯并芘(B[a]P)的肝脏毒性显示了很好的敏感性,它也有助于研究遗传毒性物质对小鼠和大鼠的种间差异[10]。2.1.4　反向限制性酶切位点突变分析法(inverserestrictionsitemutation,iRSM)由英国威尔士大学分子遗传和毒理中心建立并完善的[11]。iRSM适用于快速检测诱变剂所致体内外DNA的突变,但这些突变的特点是使某一酶切位点变为另一酶切位点。该方法建立者Jenkins等首先将iRSM应用于化学诱变剂所致动物体内p53基因的突变检测,取得了良好的结果:小鼠分别口服N-乙基N-亚硝基脲(ENU)、2-乙酰氨基芴(2-AAF)和二甲基酰肼(DMH)3天后,以iRSM方法相应地检测小鼠脾、骨髓和肝组织p53基因第6内含子区域的Apa→Ava位点反向突变。结果表明ENU诱发肝组织p53基因突变的发生率为33%,2-AAF使肝组织突变的发生率为25%,这一阳性突变率反映出了不同诱变剂对相应组织的致突变强度,进一步验证了该方法的高灵敏度和准确性。它具有灵敏度高、快速、操作简便、以及突变检测部位明确等优点,应当说是一种较具实用价值和生命力的突变检测手段。但是,iRSM的不足之处是仅能检测诱发限制性酶切位点反向的DNA突变。根据文献资料分析,化合物致突的发生具有一定的规律性,即结构类似的一组化合物常常引起一些特定序列较固定的碱基改变。例如,烷化剂和芳香胺类虽易使一连串鸟嘌呤(G)3′端G发生突变[12,13],这可能与该部位电荷密集有关,多数活性氧生成物质的DNA致突作用也具有类似规律[14];CpG二核苷常常是DNA加成物致突变作用部位[15],所以CpG突变的检测在化合物致突检测中具有重要意义,而CpG突变常引发某些固定酶切位点的变化。很显然,iRSM可较广泛地应用于遗传毒性化合物致突作用的检测。2.2　检测染色体和染色体组畸变2.2.1　微核试验　传统的体内微核试验仍然是检测化学物质染色体损伤的基本方法。目前微核试验方法主要有以下改进:1体外微核试验　常用细胞有中国仓鼠肺细胞(CHL)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)及中国仓鼠成纤维细胞(V79)等,近年开始有用L5178Y小鼠淋巴瘤细胞和人的类成淋巴细胞TK6。也有用叙利亚仓鼠胚胎(SHE)细胞和BALB/c3T3细胞。体外试验比体内试验易于操作和控制。缺点是对直接作用的化合物有可能出现假阳性。2周围血微核试验　优点是可重复采样,自身对照,减少实验动物数。李尊爱(1999)报道刚断乳不久的小鼠(4～6周龄)用于外周血网织红细胞微核试验比年龄更大的敏感些[16]。3胞质分裂阻滞法微核试验(CB-MNT)　很好地排除了细胞分裂的影响。该法中,双核细胞是只分裂了一次的细胞,其结果更加稳定敏感。CB-MNT可观察到多种遗传学终点。观察不同分裂期的细胞比例,计算核分裂指数能检测诱变物对细胞周期的影响。还可检测切除修复,次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)位点变异,凋亡。认为该试验可使计数值提高,达到传统方法的两倍或以上。但也偶小于两倍的结果(李来玉,1996)。最近Garriott和Phelps等推荐了关于体外双核细胞微核试验的几个参数条件:细胞松弛素B不影响试验结果;计数2000个双核细胞;长时间暴露没有必要;结果用趋势检验分析;根据相应的细胞毒性选择适当的浓度[17]。2.2.2　染色体畸变试验　染色体畸变试验是检测化学物质影响染色体数量和结构的基本方法。在化学物质安全性评价中常选体外CHL细胞染色体畸变、精原细胞染色体畸变试验等检测化学物质对染色体的影响。为了准确观察诱发的畸变频数,本试验收获细胞的时间应尽量提前至大多数细胞处于染毒后第1次有丝分裂时(Tucker,1996)。对于染色估数目改变,原则上只适合超倍体的观察。因为涂片时可能人为地把染色体推出细胞外(Tucker,1997),Danford曾建议在制备标本时减弱低渗处理能力,以免涨破细胞膜,从而能准确观察亚二倍体。经研究,认为以0.094mo1/LKC1弱低渗液处理2min～3min是达此目的的最佳条件(楼铁柱,1997)。2.2.3　荧光原位杂交(FISH)技术　荧光原位杂交最早由Bauman(1980)建立,后由Lucas(1989)首先应用于染色体畸变分析。其原理是按检测目标准备恰当的DNA序列作为探针,并用生物素标记,对载玻片上待测标本中的DNA杂交,最后通过杂交位点的荧光观察染色体结构或数目的改变。应用特殊染色体和染色体某区域的荧光探针可在体内检测4种类型的细胞遗传学终点[18]。1检测中期细胞染色体畸变。2应用亚染色体区域的探针检测间期染色体断裂和非整倍体。3应用中心粒探针和/或抗着丝点抗体检测微核的形成。Schriever-Schwemmet等利用CREST间接免疫荧光法,以及小鼠次要和主要卫星DNA探针,在小鼠骨髓细胞证明了受试物引起微核的来源[19]。4哺乳动物精子非整倍体检测。徐德祥(1999)用双色FISH方法对丙烯腈接触男工精子性染色体数目畸变进行了检测,证明FISH技术用于检测精子染色体数目畸变实验结果稳定可靠。2.3　检测DNA原始损伤2.3.1　单细胞凝胶电泳技术　单细胞凝胶电泳分析(singlecellgeleletrophoresis,SCGE)是Ostling等(1984)首创的,以后经Singh等(1988)进一步完善而逐渐发展起来的一种快速检测单细胞DNA损伤的实验方法,因其细胞电泳形状颇似慧星,又称慧星试验(cometassay)。Kizilian(1999)改进了一些试验条件,能明显将细胞调亡和细胞坏死的形象与“彗星”区分。MarkS.Rundell等(2003)报道彗星试验测行的损伤主要是由致突变剂引起的[20]。RichardD.Bowden等(2003)研究出了一种新的分析试验结果的彗星尾图谱,可以更加准确的分析彗星的长度及密度[21]。SCGE是评价遗传毒性损害非常敏感的实验,可以检测到每1.657×10-37kg中0.1个DNA的断裂。与经典的染色体畸变、微核、SCE相比,SCGE可以用于活细胞DNA的检测,也能用于死亡细胞DNA的分析,使SCGE不仅可以研究低剂量下的生物效应,也可用于研究高剂量下的生物效应;同时SCGE又可提供DNA修复能力的信息,这使得SCGE非常适用于评价受试物的遗传毒性

【核试验】的意思是什么？【核试验】是什么意思？ 【核试验】的意思是： 通过核装置的爆炸对核技术进行的试验研究工作。可分为大气层试验、高空试验、地下试验和水下试验。主要目的是鉴定核装置的爆炸威力等性能指标，测量和积累有关冲击波、光辐射、电磁辐射等数据资料，研究各种杀伤破坏效应等。★「核试验」在《现代汉语词典》第527页★「核试验」在《汉语辞海》的解释 核试验是什么意思 通过核装置的爆炸对核技术进行的试验研究工作。可分为大气层试验、高空试验、地下试验和水下试验。主要目的是鉴定核装置的爆炸威力等性能指标，测量和积累有关冲击波、光辐射、电磁辐射等数据资料，研究各种杀伤破坏效应等。 ★「核试验」在《现代汉语词典》第527页 ★「核试验」在《汉语辞海》的解释 核试验的英语单词1.nuclear trial2.a nuclear test3.nuclear testing4.nt5.nuclear weapons testing6.nuclear test 用核试验造句 1.该公约一旦缔结,将成为《全面禁止核试验条约》之后又一个推动核裁军和防止核扩散的重要成果。2.该 *** 禁止核试验。3.核试验是在标准状况下进行的。4.禁止核试验的想法原是在五十年代初期由于氢弹的发展而提出来的。5.裤式拖网法是渔具选择性研究方法之一,其网形和校核试验于2002年1月在挪威特鲁姆瑟海湾进行。6.利用蚕豆根尖微核试验监测遗爱湖水体遗传毒性的研究7.我们已经停止了核试验，>

微核产生的原因有自发的，和外界物理和化学因素造成的，物理因素包括各种辐射等，化学因素就是各种有毒有害的化学物质。有的化学农药可以造成DNA分子和染色体断裂，所形成的染色体断片残留在细胞质中，就有可能形成微核。这也正是微核试验可以检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂的原理。

前药设计。从作用机制上讲，VV116与瑞德西韦相似，都是前药设计，其口服吸收后迅速代谢为母体核苷（VV116核苷116-N1），该核苷在体内组织能够广泛分布。116-N1随后转化为与瑞德西韦相似的氘代的三磷酸形式核苷酸类似物，插入到正在延长的RNA链中，阻断RdRp的复制。目前，Ames试验和微核试验也证实VV116无致突变作用。VV116是目前国内唯一获批进入临床试验的新冠治疗小分子药物。由上海药物所等联合研发，于2021年11月初获批临床试验。目前，国外已有默沙东的莫努匹韦和辉瑞的帕昔洛韦等2个小分子药物获批上市。

药理作用右佐匹克隆是一种非苯二氮卓类催眠药。右佐匹克隆催眠作用的确切机制尚不清楚，但认为是作用于与苯二氮卓受体偶联的GABA受体复合物引起的。毒理研究遗传毒性右佐匹克隆的小鼠淋巴瘤细胞染色体畸变试验结果阳性、CHO细胞染色体畸变试验结果不明确，Ames试验、UDS试验、小鼠微核试验结果均为阴性。右佐匹克隆代谢产物(S)-N-脱甲基-佐匹克隆的CHO细胞、人淋巴细胞染色体畸变试验结果为阳性，Ames试验、32P-末端标记DNA加合试验、小鼠在体骨髓细胞染色体琦变试验、微核试验结果均为阴性。生殖毒性在生育力与早期胚胎发育毒性试验中，雄性与雌性大鼠经口给予右佐匹克隆分别达45、180mg/kg/天，两种性别动物的生育力均降低，雌雄动物在高剂量给药时，雌性动物未发生妊娠，未见影响剂量均为5mg/Kg/天(按mg/m2推算，相当于人最大推荐剂量的16倍)。其他影响包括着床前丢失增加(无影响剂量为25mg/Kg)、动情周期异常(无影响剂量为25mg/Kg)，以及精子数量与活动度降低、形态异常的精子数增加(无影响剂量为5mg/Kg)。在胚胎-胎仔发育毒性试验中，妊娠大鼠与家兔在器官形成期经口给药，在所测试的最高剂量下未见致畸毒性(分别为250与16mg/Kg/天，按mg/m2推算分别相当于人最大推荐剂量的800与100倍)。在大鼠中，在出现母体毒性的剂量125、150mg/Kg/天时，可见胎仔重量轻微降低，发育迟缓，但剂量为62.5mg/Kg/天(按mg/m2推算相当于人最大推荐剂量的200倍)时未见改变。 在围产期毒性试验中，大鼠在妊娠与哺乳期经口给予右佐匹克隆达180mg/Kg/天。可见各剂量组着床后丢失增加，幼仔体重与存活率降低，幼仔惊吓反应增强。最低剂量为60mg/Kg/天，按mg/m2推算分别相当于人最大推荐剂量的200倍。试验中未见明显的母体毒性，对子代其他行为指标或生殖功能未见影响。致癌性SD大鼠经口给予右佐匹克隆的致癌性试验中未见肿瘤发生率增加，最高剂量为16mg/Kg/天，血浆水平(AUC)估测为人最大推荐剂量下血浆水平的80倍(雌性动物)和20倍(雄性动物)。但在SD大鼠掺食法给予消旋佐匹克隆的致癌性试验中，在剂量为100mg/Kg/天时，右佐匹克隆血浆水平高于上述右佐匹克隆致癌性试验中所达到的血浆水平，可见雌性动物乳腺癌、雄性动物甲状腺泡膜细胞腺瘤与癌发生率增加。此时，右佐匹克隆的血浆水平估测为人最大推荐剂量下水平的150倍(雌性动物)和70倍(雄性动物)。乳腺癌的发生机理尚不清楚。甲状腺肿瘤的发生率增加，认为是循环中甲状腺激素代谢增加继发TSH水平升高所致，该机制认为与人类无相关性。在B6C3F1小鼠致癌性试验中，掺食法给予消旋佐匹克隆，在最高剂量100mg/Kg/天时，可见雌性动物肺脏肿瘤发生率增加，雄性动物皮肤纤维瘤与肉瘤发生率增加。上述剂量下右佐匹克隆的血浆水平为人最高推荐剂量下水平的8倍(雌性动物)和20倍(雄性动物)。皮肤肿瘤的发生是由于动物攻击行为所致，与人类无相关性。在一项CD-1小鼠的致癌性试验中，经口给予右佐匹克隆达100mg/Kg/天，未见肺脏与皮肤肿瘤发生率增加。该试验中最高剂量下血浆水平估测为人最大推荐剂量下水平的90倍，即达到了上述消旋体试验中暴露量的12倍。在P53转基因小鼠试验中，在经口给药剂量达到300mg/Kg/天时，未见肿瘤发生率增加。

指导意见：淋巴结肿大是细菌沿淋巴管侵人淋巴结所致，你可以吃克拉霉素分散片再加点板蓝根，期间要多吃新鲜水果蔬菜，不要吃酸辣及刺激性食物、禁烟酒、少吃油炸类食物。你好朋友，这种情况建议你最好去中医辩证的啊，可以使用中药来治疗的啊，根据病情：这样的情况应该没有关系的，可以结合临床症状给以治疗。具体可以咨询医生大夫对症治疗。分享简要介绍微核细胞率micronucleus frequency，在CB法微核试验中指1000个双核细胞中含有微核的细胞数。测定外周血淋巴细胞微核率测定作为对职业性放射性工作者所受辐射损伤的评价是一项非常有意义的指标，亦列为我国慢性放射病诊断的重要检测指标之一。健康成人外周血淋巴细胞微核细胞率正常值范围为0-6‰,均值为1.2‰,

2018年8月10日，美国FDA宣布批准Onpattro（Patisiran），是批准的首款siRNA药物及首个非病毒给药系统的基因治疗药物。RNAi疗法的上市，是诺贝尔奖成果从概念走向实际治疗用途的一个光辉里程碑。本文主要就Onpattro的临床前安全性评价展开概述，为国内外正在研究的siRNA药物临床前安评提供参考。 siRNA简介 RNA药物旨在通过基因的表达、沉默等功能治疗疾病，基因治疗被业界认为是继化学小分子药物、生物大分子药物之后的第三代治疗药物。目前，RNA药物主要可分为四大类，即miRNA, siRNA，ASO，核酸适配体。由于siRNA药物疗效较好、技术取得突破，目前最受关注，siRNA目前是RNA药物中最主要的一类。 小干扰RNA（Small interfering RNA；siRNA），是一类双链RNA分子，长度为20-25个碱基对。它的作用机制是：长链双RNA（double-stranded RNA，dsRNA）被剪切为siRNA后，与蛋白质结合形成siRNA诱导干扰复合体(siRNA induced interference complex, RISC)，RISC再与靶基因的mRNA,结合，使mRNA降解,并最终静默特定基因表达。 Onpattro (Patisiran)基本信息 Onpattro适应症为遗传性转甲状腺素蛋白淀粉样变性（hATTR）引起的周围多发性神经疾病，机制为沉默hATTR mRNA的表达，减少产生hTTR蛋白，逐渐减少周围神经中淀粉样沉积物（hTTR）的积累，最终达到治疗疾病的目的。临床给药途径为静脉输注，每3周1次。siRNA分子的分子量约为14kD，具有生物大分子结构特性。 载体导入技术是siRNA药物的制剂难点。Onpattro是一种脂质复合物注射液，将siRNA包裹在脂质纳米颗粒（LNP）中，静脉输注后药物直接递送至肝脏细胞内。Onpattro曾获得美国FDA授予的突破性疗法认定、优先审评资格、快速通道资格和孤儿药资格。 Onpattro 临床前安评 PK试验。体内分别做了ADME试验：大鼠和食蟹猴单次PK试验，放射性标记的大鼠和食蟹猴组织分布，大鼠代谢产物鉴定、大鼠排泄物质平衡。体外试验有：血浆蛋白结合，体外代谢产物鉴定、CYP诱导、CYP抑制、转运体抑制实验。 一般毒理。种属的选择是大鼠和猴。给药途径与临床一致，都是静脉输注。给药频率，临床上是每3周给药一次。分别开展了大鼠和猴6周每2周给药1次（总计4次）并伴随60天恢复期的毒理和毒代试验。由于Onpattro是一种脂质纳米微粒(LNP)复合物注射液，在大鼠和猴毒理试验中分别设置1组AF-011-1955（含有抗荧光素酶的siRNA，整合在了LNP）考查期毒性。在大鼠试验中，在所有给药组发现肝脏组织病理学变化，没有找到NOAEL（怀疑是LNP介导的毒性），所以开展了大鼠Patisiran 4周毒理试验，每4周给药一次，总计2次。在该试验中所有给药组又发现肝脏组织病理学变化，用LD（半数致死量）作为NOAEL。在大鼠试验中，通过增加GLP试验继续探索NOAEL，为毒理试验中未找到NOAEL提供了借鉴。 遗传毒理。开展了3个经典的遗传毒理试验: Ames、染色体致畸变试验、小鼠体内微核试验。对于LNP中两个新的赋形剂，也分别开展了Ames和染色体致畸变试验。 安全药理。心血管、呼吸、中枢神经系统整合在一个试验中考查，种属选的猴。此外还有体外hERG试验，不过考查的是LNP对hERG作用。 此外还开展了一些特殊毒理试验，还包括体外溶血试验、HPMC细胞因子试验、小鼠免疫刺激试验。 Onpattro分子的分子量约为14kD，具有生物大分子结构特性。药代部分，体内ADME做的很全，体外试验，将重要的都做了，足够支持临床I期。总体上，Onpattro临床前毒理试验做的非常全面。一般大分子不做遗传毒理，原因是主要作用于细胞表面或间质，而不会与染色体或DNA作用。然而Onpattro静脉输注后药物直接递送至肝脏细胞内，所以也考查了遗传毒理。 展望 说到近些年的热点，siRNA疗法无疑是其中之一。第1个siRNA药物获批，对整个领域有巨大的振奋作用。资本回归RNAi领域，掀起第二次投资热潮；加上政府、政策鼓励，RNAi药物迎来发展机遇。siRNA药物疗效好，技术取得突破，成为当前RNAi类药物最受关注的一类技术，也将当仁不让的成为主流的RNAi药物。通过对首款siRNA药物Onpattro的临床前安评概述，为siRNA药物临床前方案设计提供一些参考和借鉴。

在化学物质中，有很多能引起染色体的异常。染色体是遗传物质的载体并含有生物体全部的遗传信息，染色体遗传信息的异常可不同程度地影响生物机体的生存。轻者突变，重者死亡。同样，对人类就会引起各种疾病和损害。对肿瘤细胞的详细研究表明，大多数肿瘤细胞都存在染色体异常。此外，先天性染色体异常可引起多种遗传性疾病。如：21号染色体三体就可引起唐纳氏综合征(先天愚 型)，而5号染色体短臂部分缺失(5P一)引起猫叫综合征。因此，染色体仅出现微小的异常变化，都可能对人体健康产生非常严重的影响。化学物质能否诱发染色体异常?目前有许多种评价方法。但最常用的是：直接观察染色体异常(染色体中期相分析，chromosomal analysis，简称cA)和检测由于染色体丢失或断片形成而出现的微核(微核试验，mieronucleus test，简称MNT)。MNT是公认的检测染色体异常的简便方法。特别是应用小鼠骨髓红细胞微核(micronuclei，简称MN)检测方法，目前已成为一种能获得大量客观数据的化学物质遗传毒性评价体系。

　　微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。目的：化学物质遗传毒性评价。原理：通过染色体丢失或断片形成而出现的微核检测染色体异常。步骤与结果：最常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。以受试物处理啮齿类动物，然后处死，取骨髓，制片、固定、染色，于显微镜下计数PCE中的微核。如果与对照组比较，处理组PCE微核率有统计学意义的增加，并有剂量-反应关系，则可认为该受试物是哺乳动物体细胞的致突变物。希望能帮到你！

微核试验在对外来化合物(如药品、食品添加剂、农药、化妆品、环境污染物等)遗传毒性和职业暴露人群遗传损害监测和现场生态环境检测方面，在诊断和预防肝癌、食管癌、肺癌等恶性肿瘤方面得到了大量的应用。微核试验最大的优点是经济、简单、快速，而国内外大量的对试验研究，比较一致的看法是该方法在敏感性、特异性和准确性方面，与经典的染色体畸变分析方法基本相当川。因而，特别适合作为大量化合物和现场人群初筛的实验方法。微核试验创建于20世纪70年代中期(1973~1975)[3.‘〕，目前许多国家和国际组织，已将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等毒理安全性评价的必做实验〔5一8〕。

　　微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。目的：化学物质遗传毒性评价。原理：通过染色体丢失或断片形成而出现的微核检测染色体异常。步骤与结果：最常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。以受试物处理啮齿类动物，然后处死，取骨髓，制片、固定、染色，于显微镜下计数PCE中的微核。如果与对照组比较，处理组PCE微核率有统计学意义的增加，并有剂量-反应关系，则可认为该受试物是哺乳动物体细胞的致突变物。希望能帮到你！

在化学物质中，有很多能引起染色体的异常。染色体是遗传物质的载体并含有生物体全部的遗传信息，染色体遗传信息的异常可不同程度地影响生物机体的生存。轻者突变，重者死亡。同样，对人类就会引起各种疾病和损害。对肿瘤细胞的详细研究表明，大多数肿瘤细胞都存在染色体异常。此外，先天性染色体异常可引起多种遗传性疾病。如：21号染色体三体就可引起唐纳氏综合征(先天愚 型)，而5号染色体短臂部分缺失(5P一)引起猫叫综合征。因此，染色体仅出现微小的异常变化，都可能对人体健康产生非常严重的影响。化学物质能否诱发染色体异常?目前有许多种评价方法。但最常用的是：直接观察染色体异常(染色体中期相分析，chromosomal analysis，简称cA)和检测由于染色体丢失或断片形成而出现的微核(微核试验，mieronucleus test，简称MNT)。MNT是公认的检测染色体异常的简便方法。特别是应用小鼠骨髓红细胞微核(micronuclei，简称MN)检测方法，目前已成为一种能获得大量客观数据的化学物质遗传毒性评价体系。

近年来，随着分子生物学技术的迅速发展和渗透到微核研究中，大大拓展了微核试验的检测和应用范围，已发展成为能同时检测染色体断裂、丢失、分裂延迟、分裂不平衡、基因扩增、不分离、DNA损伤修复障碍、HPrt基因突变、凋亡、细胞分裂不平衡等多种遗传学终点的检测，因而近年来国际上有人提出了新微核试验(newmi一cronucleustest)概念，从而大大拓展了微核试验的应用范围。当然，要实现一个实验多个遗传损害终点的检测，需要更多的新的技术手段配合，如FISH技术、图象分析卜技术等等，这也对我国的实验室条件和研究水平提出了更高的要求。

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核试验的词语解释是：核试验héshìyàn。(1)指核武器的试验。核试验的词语解释是：核试验héshìyàn。(1)指核武器的试验。注音是：ㄏㄜ_ㄕ_一ㄢ_。拼音是：héshìyàn。结构是：核(左右结构)试(左右结构)验(左右结构)。核试验的具体解释是什么呢，我们通过以下几个方面为您介绍：一、网络解释【点此查看计划详细内容】核试验核试验，为了军事研究和科学研究目的在预定条件下进行的核爆炸装置或核武器爆炸试验。其主要目的是：鉴定核爆炸装置的威力及其他性能，验证理论计算和结构设计是否合理，为改进核武器设计或定型生产提供依据；在核爆炸环境下研究核爆炸现象学和各种杀伤破坏因素的变化规律；研究核爆炸的和平利用等。它是一项规模很大、需要多学科、多部门协同配合和耗费大量人力、物力的科学试验，人类的第一次核试验是在美国新墨西哥州的洛斯阿拉莫斯洛斯阿拉莫斯国家实验室完成的。关于核试验的成语卖李钻核发硎新试综核名实循名核实屡试屡验危言核论关于核试验的词语简约详核危言核论经验之谈事核言直经验主义驰马试剑发硎新试日省月试综核名实持戈试马关于核试验的造句1、朝方作为报复驱逐了联合国核查员，同时扬言重新启动一家生产钚的军工企业，并且要进行核试验。2、这件事是真的，那个人的确是能量级第五层的武者，我在阿巴坎核试验区和他激斗过!3、此次核试验中还采用了双轴针孔照像技术，标志着我国的核试验测试诊断达到了国际先进水平。4、此番的导弹试射与地下核试验可视为第五个回合，是朝鲜核、导角逐战略“以攻为守”的转换。5、应用小鼠骨髓微核试验及小鼠睾丸染色体畸变试验，测试蜂胶对诱变剂诱发的染色体损伤的保护作用。点此查看更多关于核试验的详细信息

核试验的成语有：循名核实，危言核论，发硎新试。核试验的成语有：综核名实，循名核实，发硎新试。2：结构是、核(左右结构)试(左右结构)验(左右结构)。3：拼音是、héshìyàn。4：注音是、ㄏㄜ_ㄕ_一ㄢ_。核试验的具体解释是什么呢，我们通过以下几个方面为您介绍：一、词语解释【点此查看计划详细内容】核试验héshìyàn。(1)指核武器的试验。二、网络解释核试验核试验，为了军事研究和科学研究目的在预定条件下进行的核爆炸装置或核武器爆炸试验。其主要目的是：鉴定核爆炸装置的威力及其他性能，验证理论计算和结构设计是否合理，为改进核武器设计或定型生产提供依据；在核爆炸环境下研究核爆炸现象学和各种杀伤破坏因素的变化规律；研究核爆炸的和平利用等。它是一项规模很大、需要多学科、多部门协同配合和耗费大量人力、物力的科学试验，人类的第一次核试验是在美国新墨西哥州的洛斯阿拉莫斯洛斯阿拉莫斯国家实验室完成的。关于核试验的词语研核是非日省月试经验之谈经验主义循名核实事核言直简约详核综核名实持戈试马驰马试剑关于核试验的造句1、为适应中国原子能事业发展的需要，贝时璋开创了放射生物学研究，建立了核试验落下灰监测站和天然放射性测量技术。2、奥本海默说了举世闻名的一句话，他说，这场核试验让他目睹了令人难以置信的残忍景象，由此他联想到印度佛经里的语句，在薄伽梵歌曰：“现在我变成了死神，世界的毁灭者。”。3、应用小鼠骨髓微核试验及小鼠睾丸染色体畸变试验，测试蜂胶对诱变剂诱发的染色体损伤的保护作用。4、在大气层中进行核试验现在已被一项国际条约所禁止。5、这些气球从阿拉莫戈多升空，是设计来探测核试验产生的声波的。点此查看更多关于核试验的详细信息

【答案】：AAmes试验、基因正向突变试验的检测终点是基因突变，微核试验和染色体畸变试验的检测终点是染色体畸变，检测DNA损伤的试验有：姐妹染色单体交换试验、程序外DNA合成（UDS）试验，因此正确答案选A

【答案】：DAmes试验即鼠伤寒沙门菌回复突变试验。该试验以鼠伤寒沙门菌的组氨酸营养缺陷型菌株为指示生物，这些菌株的组氨酸操纵子发生了基因点突变，丧失了合成组氨酸的能力，突变型菌株的自发回变率都很低，但容易被各种致突变因素诱导，回复突变为野生型，即恢复了合成组氨酸的能力，在不含组氨酸的选择培养基上可以生长成可见的菌落。根据选择培养基上回变菌落数显著地超过了自发回变数，即可判定受试物为鼠伤寒沙门菌的致突变物。微核试验（MNT）：物种为哺乳动物，靶细胞为体、性细胞，体内/体外实验都可以，遗传学重点为染色体畸变、非整倍体。染色体畸变试验：物种为哺乳动物，靶细胞为体、性细胞，体内/体外实验都可以，遗传学重点为染色体畸变。小鼠睾丸细胞染色体畸变试验，属于染色体畸变试验的一种，它是以小鼠为实验动物，为体内试验，观察其性细胞内染色体的改变。显性致死试验：物种为哺乳动物，靶细胞为性细胞，进行体内实验，遗传学终点为染色体畸变。哺乳动物细胞基因突变试验：靶细胞为体细胞，属于体外实验，遗传学终点为基因突变。

看你是想快一点还是慢一点了，快一点的有用动物细胞培养液来试验，观察染色体受损情况，或者是进行微核试验。慢一点的就是用该物质饲养动物，然后解剖观察。

药理作用来氟米特为具有抗增殖活性的异恶唑类免疫抑制剂，其作用机理主要是抑制二氢乳清酸脱氢酶的活性，从而影响活化淋巴细胞的嘧啶合成。体内、外试验表明，本品具有抗炎作用。来氟米特的体内活性主要通过其活性代谢产物A771726(下称M1)而产生。毒理研究遗传毒性：来氟米特Ames试验、程序外DNA合成试验、HGPRT(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶)基因突变试验结果均为阴性。另外，来氟米特在小鼠微核试验及中国仓鼠(在体)骨髓细胞试验中均未出现致染色体畸变作用，而来氟米特的次要代谢物4-三氟甲基苯胺(TFMA)在Ames试验、HGPRT基因突变试验和中国仓鼠细胞(体外)染色体畸变试验中均出现该作用，但TFMA在小鼠微核试验和中国仓鼠(在体)骨髓细胞遗传学试验中均未出现该作用。生殖毒性：来氟米特经口给药剂量高达4.Omg/kg，对雄性和雌性大鼠生育力无影响。临床上孕妇服用来氟米特时可引起胎儿损害。怀孕大鼠在器官形成期经口给予来氟米特15mg/kg(按AUC计算，大鼠M1的全身暴露量约为人暴露量的1/10)出现致畸作用，主要表现为无眼或微眼、梗阻性脑积水。在此暴露量下，来氟米特还引起孕鼠体重下降、胎鼠死亡增加及体重下降。怀孕家兔在器官形成期给予来氟米特10mg/kg(按AUC计算，大鼠M1的全身暴露量约等于人的最大暴露量),导致胸骨融合和发育不良。大鼠和家兔在来氟米特1mg/kg剂量下未出现致畸作用。雌性大鼠在交配前14天至哺乳期末给予来氟米特1.25mg/kg(按AUC计算，大鼠M1的暴露量约等于人最大暴露量的1/100)，仔鼠的生存率出现明显(大于90%)的降低。致癌性：在大鼠连续2年口服来氟米特达最大耐受剂量6 mg/kg(按AUC计算，约为人M1最大全身暴露量的1/40)的试验中，末出现致癌作用。但是，在连续2年经口给予最大剂量15 mg/kg(按AUC计算，约为人M1全身暴露量的的1.7倍)的研究中，雄性小鼠出现淋巴瘤发生率增加，雌性小鼠在1.5mg/kg剂量下(起始剂量，按AUC计算，约为人M1全身暴露量的1/10)出现剂量相关性的支气管肺泡腺瘤和支气管肺泡癌发生率增加。以上小鼠研究结果的临床意义尚不清楚。

遗传毒性：棕榈酸帕利哌酮Ames试验、小鼠淋巴瘤试验结果均为阴性，帕利哌酮Ames试验、小鼠淋巴瘤试验、大鼠微核试验结果均为阴性。生殖毒性：在一项生育力试验中，经口给予帕利哌酮，剂量高达2.5mg/kg/天时，雌性大鼠妊娠率未见影响。但是，在该剂量下，着床前与着床后丢失率增加，活胎数轻微降低，也可见轻微的母体毒性。在剂量为0.63mg/kg时这些指标未受影响，按mg/m2推算，该剂量相当于人最大体推荐剂量12mg/天（INVEGA）的一半。雄性大鼠经口给予帕利哌酮，剂量高达2.5mg/kg/天时生育力未受影响，但未进行精子计数和精子活力研究。利培酮在犬和人体中会广泛转化为帕利哌酮。在Beagle犬长期毒性试验中，所有测试剂量（0.31-5.0mg/kg）下均可见血清睾酮减少、精子活力及浓度下降。停药两个月后，血清睾酮和精子相关指标部分恢复，但仍处于降低水平。妊娠大鼠和家兔于主要器官形成期经口给药帕利哌酮，最高测试剂量（大鼠10mg/kg/天，家兔5mg/kg/天，按mg/m2推算，相当于人最大体推荐剂量的8倍）下未见胎仔畸形发生率增加。利培酮在大鼠和人体中会广泛转化为帕利哌酮。大鼠利培酮生殖毒性试验中，在给药剂量按mg/m2推算低于人最大体推荐剂量时，可见幼仔死亡率增加(参见利培酮说明书)。致癌性：在大鼠中进行了棕榈酸帕利哌酮肌肉注射给药的致癌性试验。雌性大鼠在剂量为16、47、94mg/kg/月时可见乳腺腺癌发生率增加，按mg/m2推算，上述剂量分别相当于人体最大推荐剂量234mg（善思达）时的0.6、2、4倍。雄性大鼠在剂量为47、94mg/kg/月时可见乳腺腺瘤、纤维瘤和乳腺癌发生率增加。未进行棕榈酸帕利哌酮的小鼠致癌性试验。在Swissalbino小鼠和Wistar大鼠中进行了利培酮致癌性研究，该药物在大鼠、小鼠和人体中会广泛转化为帕利哌酮。掺食法给予利培酮，日剂量为0.63、2.5、10mg/kg，小鼠连续18个月，大鼠连续25个月。结果显示，动物脑垂体腺瘤、内分泌胰腺瘤和乳腺癌发生率显著升高。按mg/m2推算，对这些肿瘤的无影响剂量，小于或等于利培酮的人最大推荐剂量(参见利培酮说明书)。在其他抗精神病药的啮齿类动物长期给药试验中也发现乳腺、脑垂体、胰腺肿瘤的发生率增加，认为是多巴胺D2受体长期拮抗和催乳素水平升高所致。在啮齿类动物中观察到的这些结果与人类的相关性尚未明确。

毒理学是一门研究化学物质对生物体的毒性反应、严重程度、发生频率和毒性作用机制的科学，也是对毒性作用进行定性和定量评价的科学。毒理学与药理学密切相关，目前已发展成为具有一定基础理论和实验手段的独立学科，并逐渐形成了一些新的毒理学分支。本文就新技术在分子毒理学中的应用及毒理学的一些发展趋势作一简述。 　　1　基因引入技术在毒理学中的应用 　　分子毒理学研究是采用分子生物学技术和方法来研究毒理学问题。如体外采用细胞培养等检测基因毒性，整体动物试验采用转基因动物模型，这对于阐明外源性化学物的毒性及其机制均有重要意义。 　　基因引入技术是把一段DNA（可以是一个完整的基因，也可以是一个基因片段）引入到细胞或生物体内。引入的DNA可以改变毒物的作用强度，或改变毒物作用方式。因此，可以通过毒物作用程度或方式的改变来判断引入的DNA所起的毒性作用。 　　1.1　在致突变检测中的应用 　　基因毒物是指能损害遗传物质DNA的化学物，大多为致突变剂。常规的Ame′s试验是由细菌介导的检测考试，大网站基因毒物的方法。但这种方法也有一定的局限性，有时可出现假阳性结果。如谷胱甘肽和半胱氨酸均为抗癌剂，但在Ame′s试验中却显示较强的致突变能力。此外，细菌和动物细胞在其生物学方面有很大差异，因此体外动物细胞实验较细菌更能反映毒物在机体内的作用。有两类细胞常用于基因毒物的检测，一类为原代细胞，另一类为传代细胞。有多种指标用于检测化学物的基因毒性，如核苷酸同位素标记法，若一种化学物能损害DNA，细胞在用该化学物处理后，对损害的DNA要进行修复，修复过程需要核苷酸，如果在培养基中加入同位素标记的核苷酸，则修复的DNA即被同位素标记，在一定情况下，损害的DNA越多，修复的就越多，细胞DNA含的同位素就越多。因此，通过检测DNA中同位素的含量来决定该化学物的基因毒性。另一种判断方法是根据基因毒物能改变细胞的代谢。如正常的V79细胞具有次黄嘌呤磷酸转移酶，这种酶是正常替代途径中合成嘌呤核苷酸的必需酶。如果培养基中有嘌呤的同系物（如8-偶氮鸟嘌呤），这种酶能将其同系物转化成相应的嘌呤核苷酸而合成DNA，但嘌呤同系物没有正常嘌呤功能，因此会导致细胞死亡。相反，如果一种化学物能损害DNA而使次黄嘌呤磷酸转移酶的基因发生损害而不能合成正常的酶，其受损的细胞反而存活下来。存活的细胞越多，在一定情况下说明该化学物的致突变能力越强。 　　某些化学物本身并没有毒性，但其代谢物显示出较强的毒性作用。对于这些化学物，上述方法不能检测出它们的毒性。为了克服这一缺点，可在细胞或细菌培养液中加入肝细胞抽提液以帮助代谢毒物。有的实验室还用少量原代细胞与被检的传代细胞混合培养，由引入的原代细胞提供代谢酶。如硝基二甲基胺，用常规的细菌检测系统显示不出任何突变作用，但在细菌培养液中加入肝细胞抽提液后，显示出很强的基因毒性。这些实验也存在许多问题，如有些代谢物的半衰期很短，来不及进入检测细胞与其DNA作用就失活了，肝脏抽提液或原代细胞代谢酶活性随时间下降得很快；肝脏抽提液或原代细胞含多种酶，即使能代谢毒物并显示出毒性，也不知道是哪种酶起主导作用。很显然，建立一种细胞株，能合成某种单一的酶，对研究毒物的毒性作用很重要。利用分子生物学技术，把转录某种代谢酶的DNA连接，再接到基因载体上（多为质粒或病毒），这段具有调控能力的DNA，能与体外培养细胞的转录因子作用，把含有编码某种代谢酶的DNA的基因载体引入到体外培养细胞，该细胞就能表达这种特异的酶。这方面较突出的例子是细胞多功能性单胺氧化酶（P450）。体外建立能表达P450的细胞株有两类，一类是能长期稳定表达的细胞株，一类是能短期表达的细胞株。人的多种P450，如1A1，2A6，2E1，3A4等，已成功地引入人的淋巴样细胞株、鼠的胎盘细胞株、苍鼠肝癌细胞株等，这些细胞株由于能表达毒物代谢酶，对需要代谢后才有毒性的化学物，其检测敏感度提高许多倍。如表达2A6的细胞比不表达2A6的同样细胞株，在检测硝基二甲基胺的毒性方面要敏感500倍；比表达2E1的细胞也要敏感大约500倍。说明硝基二甲基胺要代谢以后才能显示毒性，也说明2A6是能将硝基二甲基胺转化为毒性代谢物的代谢酶，而2E1则不是。 　　1.2　转基因动物在毒理学中的应用 　　转基因动物是在其基因组中含有外来遗传物质的动物，它被广泛应用于科学研究的各个方面。由于转基因动物集整体、细胞和分子水平于一体，更能体现生命整体研究的效果，因此成为毒理学研究的热点之一。 　　1.2.1　一般毒性研究模型 　　C-fos-LacZ转基因小鼠用于神经毒性的研究。金属硫蛋白（MT）基因的转基因和基因删除小鼠用于金属和某些非金属的研究。如用MT转基因小鼠对镉等的抗性增加，而MT的基因删除小鼠对镉、银、汞、顺铂和四氯化碳的毒性敏感性增强。 　　1.2.2　致突变检测模型 　　转基因动物为解决遗传毒性研究中长期存在的一些问题提供了可能性。如体外试验和体内整体动物的定性、定量外推，整体动物基因突变需消耗大量动物和时间，如确定靶器官以及对诱发的遗传改变做精细分析等。自Gosen等1989年建立了第一个转基因突变检测模型以来，已有十多种模型。 　　1.2.3　致癌检测模型及其在致癌物质作用机制研究中的应用 　　转基因动物为快速检测致癌物、促癌物和研究化学致癌的机制提供了新的重要途径。目前已建立的检测模型或研究模型有：①过量表达癌基因的转基因动物模型　如TG，AC小鼠，HK-fos转基因小鼠，ras-H2转基因小鼠，携带激活的H-ras原癌基因小鼠等。这些转基因动物对化学致癌剂的敏感性提高了许多倍。如带有激活Pim-l肿瘤基因的转基因动物，对乙基硝基脲的致癌作用，较相应的非转基因动物，其敏感性提高了25倍；②基因删除动物致癌检测模型　用同源重组的方法，将一段DNA整合到抗肿瘤基因，使该抗肿瘤基因不能表达具有正常功能的蛋白质，用这种方法培养的动物称基因删除动物。在这方面研究得最多的是肿瘤抑制基因P53.基因删除动物P53（+/-）和正常动物P53（+/+）一样，发育和生长均无异常，但用致癌剂（如二硝基二甲胺）处理后，P53（+/-）基因删除动物的平均寿命为29周，而P53（+/+）的平均寿命为42周，其肿瘤的发生与分布也有很大的差异。其他如芳香烃受体（AHR）小鼠、过氧化物酶体增殖剂诱导的受体α（PPARα）小鼠等；③转基因动物用于生殖毒性研究　ZP3（编码）透明带硫酸糖蛋白基因删除小鼠、雌激素受体基因或孕酮受体基因删除小鼠、DNA甲基转移酶基因删除小鼠等。 　　1.2.4　用于特定组织毒性研究的转基因动物 　　典型的例子是用含乳糖操纵子的噬菌体培育一种转基因动物，具有乳糖操纵子的噬菌体在感染某些细菌后，菌落为蓝色。如果含有乳糖操纵子的噬菌体在体内由于受化学物的处理而受到损害， 不能抄录正常的半乳糖苷水解酶，这种噬菌体在体外装配后，其感染细菌的菌落为无色。因此根据蓝色和无色菌落的多少，来判断某些化学物基因毒性的强弱。此外，用质粒作为载体也获成功，从而提高了检测的敏感性，更重要的是，化学物处理后的动物，基因载体可以从不同组织细胞分离出来，因此这种动物能显示化学物的组织细胞特异毒理学作用。 　　2　毒理学预测范畴的新进展 　　毒理学和流行病学，特别是与分子流行病学相结合应用于危险度的评价。经典方法中对安全系数作了许多附加修正，以提高种属之内与之间推导预测的精确性，但其后果使毒理学家面临来自各种行政规定而缺乏科学依据的一连串修正系数。近年来已提出了新的方法，以尽可能使实际数据而不是人为的假设来确定安全系数。如对致癌物质的评定将使用一种定量的模型，它所重视的是从高剂量到低剂量的推导，而不是从动物到人的种属间的推导。目前最常见的是线性多级LMS模型，它是将耐受量（MTD）的可信限上端延伸到原点，利用该直线的低剂量区域来估计外源性化学物的量效关系曲线或其毒性强度。这种模型使用一个对应于小生物学单位：即分子的剂量值，而不是将零作为剂量轴的原点。 　　外源性化学物安全性评价的策略新进展还包括用毒性等效性因子或问答式的方法，构效关系的定量分析，以及药效和药代动力学模型来研究复杂化学物。 　　3　21世纪毒理学的发展趋势 　　3.1　传统和现代毒理学研究方法相结合将推动毒理学的发展过程 　　过去毒理学研究主要以整体动物试验和人体观察相结合，在相当一段时期内这仍然是重要和必要的手段。随着分子生物学的理论和方法应用于毒理学的研究，将使外源性化学物的毒性评价发展到体外细胞、分子水平的毒性测试与人体志愿者试验相结合的新模式，而传统以动物为基础的毒理学研究将减少。某些复杂的整体实验将逐步为体外试验或构效关系数学模式所代替。目前用于有害因素的毒性试验系统将被基因工程的动物和细胞所代替；传统的发病率和死亡率终点将被生化指标所替代；现在需要数月给药和评价的毒性研究将在几小时内完成。转基因动物对外源性化学物的毒性反应将与人体极为一致，例如取分裂中的人组织培养细胞到体外减数分裂，现行毒性试验的解释和外推方式将改变。 　　3.2　大量新技术和新方法的应用将使毒理学研究水平更加深入 　　上面提到的一些体外细胞检测和转基因动物或基因删除动物模型应用于毒理学研究外，其他新技术如系列分析法、DNA芯片或DNA微点阵等可同时测定数千个基因的表达，用于观察基因的上调和下调；基因诱捕、代表性差异分析等将为研究化学物致畸的分子机制提供可能；应用基因分布图能区别特异性或非特异性的细胞损伤；应用络合物形成作用介导的PCR研究DNA损伤和核苷酸水平上的修复；生物标记物在毒理学中的应用显得越来越重要，如特异的DNA和蛋白质加合物用于有效暴露的生物标记，用NMR分析尿中的代谢产物，可以确定作为毒性反应生物标记物的代谢变化模式。又如外周血（血小板、白细胞、红细胞）中的生化标记物可用于测定外源性化学物对神经系统损伤的替代标志物。 　　在毒理学的研究中，重要的问题是如何把从动物所获得的资料用于人，把体外资料用于体内，把复杂的整体系统化为简单的并能人为控制的系统，以及如何提高检测的敏感性等。转基因技术为解决这些问题提供了崭新的手段。在代谢途径上，通过基因转移能人为控制某一化学物的代谢；在整体水平上，可以人为控制某一基因的表达水平，从而阐明该基因在化学物致毒过程中的作用。可以预言，各种不同的转基因动物或基因删除动物的建立，将对阐明化学物的毒性作用机制，起到重大的作用。 　　3.3　采用多种方法结合起来评价化学物的毒性将是一个重要趋势 　　过去20多年应用常规的毒理学方法研究外源性化学物，对于大多数化学物是否获得足够的毒理学信息值得怀疑。考虑到化学物质的暴露对人类健康的影响，这一问题就显得更为突出。由于毒理学试验要消耗大量动物，因此在毒理学研究中尽量减少动物用量是每一个负责任的毒理学家应该考虑的问题。显然，如果想对如此众多的外源性化学物有一个合理的改变，就应该建立新的、可供选择的、耗费动物少、试验周期较短、花费较少的毒理学研究方法。这些方法应该根据以下标准来衡量：①动物用量减少；②试验周期缩短；③研究化学物在环境中的实际浓度；④利用统计或数学模型；⑤预先进行有效的实验设计；⑥发展管理毒理学等。例如，制药工业将采用啮齿类动物（主要是大鼠）的微核试验与2～4周的毒代动力学研究结合起来的方法来评价药物。 　　3.4　毒理学分支学科形成发展迅速，“二极”分化现象更为突出 　　近30年来毒理学由于发展迅速及与相关学科的交叉而形成了许多分支。如根据工作任务可分为临床毒理学、环境毒理学、工业毒理学、管理毒理学、生态毒理学与法医毒理学等；根据研究手段与终点不同可分为免疫毒理学、分子毒理学、膜毒理学、遣传毒理学、分析毒理学等；根据研究对象可分为昆虫毒理学、兽医毒理学、人体毒理学与植物毒理学；根据不同外源性化学物可分为金属毒理学、农药毒理学、食品毒理学、放射毒理学、药物毒理学与燃烧毒理学；根据研究工作性质可分为描述毒理学（指常规毒性试验和安全评价）、机理毒理学和管理毒理学等。近年来还出现更多的毒理学分支，如比较毒理学、地理毒理学、急症毒理学等。可以预见，下世纪还将出现一些新的分支。 　　此外，毒理学分化将更为明显。一方面毒理学的软件部分——管理毒理学仍将是毒理学的研究热点之一，这将从宏观上为化学毒物的管理提供科学依据；另一方面，研究水平越来越精细，从细胞、分子和基因水平研究毒理学问题将是普通的科学工作。上述二方面既分化，又相互渗透和结合，使毒理学的软、硬件结合更为突出。 　　总之，毒理学与人类日常生活和生产劳动关系日益密切，如环境污染、生态环境的恶化、药物的不良反应、食品的安全性、兽药及农药的危害，以及作业环境的有毒物质是世界范围内的严重问题。可以预见，在21世纪毒理学将会获得更大的发展，为人类作出更大的贡献。虽然近年来细胞、分子水平的研究取得了很大的进展，但仅从基因分子水平研究外源性化学物的毒性及其机制是不够的，因为机体还有宏观的一面，必须把微观研究与宏观研究紧密结合起来，也就是将整体试验与体外细胞、分子水平的研究结合起来才能得出正确结果。

第一篇 总论... 1第一章 药物安全性评价与GLP. 1第一节 GLP的历史... 1第二节 GLP内容... 4第三节 GLP的实施步骤... 19第二章 如何编写SOPs. 25第一节 绪论... 25第二节 编写SOPs的程序... 28第三节 SOPs的一般格式... 30第四节 SOPs的类型... 30第五节 SOPs的管理... 32第六节 SOPs范例... 32第三章 药物非临床安全性评价... 42第一节 概述... 42第二节 药物安全性评价的法规依据... 44第三节 药物安全性评价规范性文件（强制执行性文件）... 47第四节 药物安全性评价工作的指导原则（建议性文件）... 48第五节 对实验动物的要求... 50第六节 对供试品的要求... 52第七节 药物安全性评价的基本内容... 52第八节 在GLP条件下进行毒理学安全性试验需要进行的项目... 57第四章 人用药品注册技术要求的国际协调会议... 60第一节 ICH指导方针的建立和执行步骤... 60第二节 单剂量毒性试验指导原则（ICH S4）... 61第三节 重复给药毒性试验（ICH S4，M3）... 61第四节 医药品生殖毒性检测指导原则（ICH S5A及ICH S5B）... 63第五节 遗传毒性试验（ICH S2A）... 64第六节 致癌研究的指导原则... 66第七节 ICH生物技术来源药物临床前安全性评价（ICH S6）... 68第八节 增加的安全性问题和指导原则... 69第九节 ICH S2（R1）人用药物遗传毒性实验和 数据评价的指导原则... 72第二篇 实验动物... 79第五章 实验动物与动物实验... 79第一节 概论... 79第二节 实验动物和毒理学安全性评价... 98第三节 影响动物实验的因素... 98第四节 动物饲养... 105第六章 动物管理组织机构及人员职责... 114第一节 动物管理和使用人员的职责及资质... 114第二节 动物饲养设施及管理职员... 114第三节 从事动物研究职员教育培训项目（美国）... 118第四节 美国实验动物协会动物饲养管理技术员教育项目... 119第五节 欧洲实验动物协会联合会推荐的从事动物工作人员的教育和培训... 126第六节 GLP体系下的培训... 142第七章 机构动物管理和使用委员会及其职能... 147第一节 机构动物管理和使用委员会... 147第二节 IACUC动物研究方案申请及审查实例... 150第三节 动物处理不当和不符合动物管理和应用要求的处理程序... 163第四节 IACUC相关SOPs. 165第八章 职业健康与人员安全... 169第一节 国家法规《实验室生物安全通用要求》... 169第二节 职业卫生与安全性及职员培训... 170第三节 具有危险性药物的动物实验... 176第四节 具体标准操作规程... 178第九章 兽医学管理——健康监测与疾病... 189第一节 兽医师与动物兽医学护理和管理... 189第二节 动物兽医管理——实验动物购买、运输、接收与检疫... 190第三节 动物健康监测... 199第四节 动物兽医学管理——麻醉、止痛、手术与安乐死... 210第五节 长时间固定动物的策略... 218第六节 采血... 219第七节 药品管理及麻醉药品管制（管制药品）... 221第八节 人畜共患疾病及其防治... 222第十章 实验动物饲养环境管理及监测... 225第一节 实验动物饲养环境的管理与监测... 225第二节 动物饲养管理的一些特殊要求... 250第三节 啮齿类动物饲养管理和使用的程序... 255第十一章 符合GLP原则的小鼠和大鼠实验... 258第一节 小鼠和大鼠的兽医学护理与管理... 258第二节 啮齿类动物饲养管理... 275第三节 啮齿类动物给药方法... 281第四节 采血，采尿，采集粪便和骨髓等样品... 287第五节 各种指标检查... 292第六节 大鼠/小鼠剖检程序... 295第十二章 放射性供试品的动物实验问题... 300第一节 概述... 300第二节 放射性物质的接收储存废弃物处理... 302第三节 放射性物质动物实验相关标准操作规程... 307第十三章 生物制剂及感染性的动物实验问题... 324第一节 生物制剂及感染制剂动物试验的管理规定... 324第二节 动物感染实验使用规范... 325第三节 生物材料动物实验申请... 331第十四章 有害物质（剧毒、致癌、致畸、致突变物质）的动物实验问题... 341第一节 实验室生物安全通用要求... 341第二节 有害化学物质安全性评价中的安全问题... 341第十五章 符合GLP原则的非人灵长类动物实验... 345第一节 猴的饲养管理... 345第二节 灵长类的饲养管理程序... 369第三节 非人灵长类动物实验室的准备程序... 370第四节 非人灵长类动物的接收和检疫... 371第五节 灵长类动物的饲养环境... 377第六节 灵长类动物的饲养管理程序... 383第七节 灵长类动物的操作和观察程序... 385第八节 非人灵长类动物的给药程序... 396第九节 灵长类动物生物样本的采集... 401第十节 死亡灵长类动物的处理程序... 403第十一节 非人灵长类动物职业危害及防护程序... 405第十六章 符合GLP原则的家兔毒性实验... 408第一节 家兔的兽医学管理——接收和检疫... 408第二节 家兔的饲养和管理程序... 414第三节 家兔的操作程序... 420第四节 家兔的临床体征观察程序... 424第五节 家兔生物样品采集程序... 427第六节 家兔饲养管理主要记录... 430第十七章 符合GLP原则的犬的毒性实验... 431第一节 在GLP条件下进行犬实验的概述... 431第二节 犬的订购、接收和检疫的标准操作程序... 436第三节 犬的饲养和管理... 444第四节 犬临床指标的检测与观察... 454第五节 犬的给药程序... 463第六节 犬生物样本的采集程序... 470第十八章 符合GLP原则的豚鼠和仓鼠的毒理学试验... 473第一节 豚鼠的兽医学管理——购买、接收和检疫程序... 473第二节 豚鼠饲养管理及给药程序... 474第十九章 毒理学安全性评价所用专业术语汇编... 478第一节 动物体征的标准化定义和观察方法... 478第二节 哺乳动物发育异常观察指标及应用术语... 496第三节 致癌物试验相关的术语表... 504第四节 遗传毒性试验相关术语表... 508第五节 眼睛毒理学相关术语表... 508第三篇 病理学在安全性评价中的应用... 512第二十章 毒理病理学操作规范概论... 512第一节 毒理病理学概述... 512第二节 病理学原始数据... 518第三节 组织病理学评价... 520第四节 病理学图像数据的评价... 526第五节 病理学数据库和毒理基因组学研究的质量评价... 530第二十一章 毒理病理学技术... 534第一节 现代影像学技术在毒理病理学中的运用... 534第二节 数字显微成像技术在毒性病理学中的新应用... 539第三节 非肿瘤性病变的定性与定量... 543第四节 免疫组织化学技术... 547第五节 原位杂交技术... 551第六节 原位PCR技术及其在病理学中的应用... 556第七节 形态计量学与图像分析仪在毒理病理学中的应用... 560第八节 激光扫描共聚焦显微技术及在毒理病理学上的应用... 574第九节 凋亡检测的常用方法及优缺点... 577第二十二章 毒理病理学基本操作... 584第一节 病理组织处理流程... 584第二节 动物的尸体解剖程序... 587第三节 各类动物的初步解剖和外部检查程序... 591第四节 大鼠吸入毒性试验的病理检查程序... 608第五节 湿组织修块... 609第六节 STP大鼠和小鼠器官取材和修块操作规范... 612第七节 组织固定、脱水、包埋程序... 622第八节 组织包埋... 624第九节 组织蜡块的修整和切片... 627第十节 切片的染色和封裱... 628第十一节 切片的质量控制和标签... 629第十二节 连续切片... 630第十三节 二次包埋程序... 630第十四节 骨组织脱钙程序... 631第十五节 特殊染色技术程序... 632第十六节 尸体解剖时血涂片的制备... 632第十七节 用甲醛蒸汽的快速固定... 633第十八节 病理组织切片读片程序... 633第十九节 啮齿类动物呼吸道组织病理学评价标准... 634第二十节 组织病理学传递单... 635第二十一节 组织病理实验室单个动物组织学记录... 636第二十二节 病理资料的存档... 636第二十三节 冷冻切片机的使用和维护... 642第二十三章 毒理病理学新技术基本操作... 644第一节 电镜样品准备的标准操作程序... 644第二节 免疫组织化学基本操作... 649第三节 原位杂交基本操作... 666第四节 原位PCR操作程序... 688第五节 形态学技术检测细胞凋亡基本操作... 692第二十四章 临床病理学检验概述... 697第一节 国际毒性试验标准指导原则要求—— 临床病理学检测指标... 697第二节 毒性试验标准指导原则要求—— 临床病理学检验间隔... 698第三节 临床病理学指标改变的意义... 700第四节 血液学检测问题... 702第五节 血液生物化学检查... 706第六节 尿液分析相关的问题... 711第七节 数据的解释... 713第八节 样品的采集和标识程序... 719第九节 遗传分析小鼠的组织采集... 720第十节 临床实验室样品的检验... 721第二十五章 临床病理学检测标准操作程序... 722第一节 血液学检测的血液标本... 722第二节 临床化学... 729第二十六章 骨髓细胞评价... 740第一节 骨髓造血与血液毒理学... 740第二节 大鼠与小鼠骨髓检查标准操作程序... 740第三节 犬骨髓的检查程序... 746第四篇 符合GLP原则的遗传毒理学试验... 749第二十七章 遗传毒理学试验概述... 749第一节 遗传毒理学评价... 749第二节 遗传毒理学试验原则... 754第三节 OECD GLP原则在体外实验中的应用简介... 756第四节 遗传毒理学试验的生物安全及防护问题... 760第二十八章 体外遗传毒性试验通用标准操作程序... 762第一节 体外致突变试验的操作与安全性规程... 762第二节 体外毒理学试验供试品处理、称重和处置... 764第三节 体外毒理学试验放射性供试品的储存、操作和管理... 766第四节 微生物材料的贮存、操作和处理... 766第五节 组织培养材料的贮存、操作和处理... 767第六节 生物安全柜的使用... 769第七节 高压灭菌器及灭菌锅的使用... 770第八节 菌落计数仪的校正和使用... 771第九节 体外毒理学试验结果的记录及归档... 771第十节 培养基和玻璃器皿的灭菌... 772第十一节 肝匀浆和S9混合物的制备... 773第十二节 肝S9制剂质量控制试验... 777第十三节 组织培养细胞的培养液的制备、质量控制和贮存... 782第二十九章 Ames试验相关的标准操作程序... 786第一节 Ames标准试验程序... 786第二节 试验菌株的维护和保存... 796第三节 Ames试验指示菌株的特性鉴定程序... 799第四节 Ames试验质量控制... 802第五节 Ames试验菌落计数及其评价... 803第六节 Ames 试验试剂的配制及储存... 810第七节 Ames试验方案、报告、QAU审查... 828第三十章 使用大肠杆菌作为指示菌的致突变试验... 840第一节 简介... 840第二节 大肠杆菌TRP回复突变试验... 840第三节 大肠杆菌DNA修复试验... 844第四节 大肠杆菌TRP回复试验培养液制备、质量控制和贮藏... 846第五节 大肠杆菌DNA修复试验培养液的制备、质量控制和贮存... 848第三十一章 酵母菌基因突变试验... 851第一节 酵母菌D5重组试验及结果分析... 851第二节 酵母菌D5的质量控制、维持和贮存... 853第三节 酵母菌D5的有丝分裂重组试验... 854第四节 酵母菌D5重组试验中培养液的制备、质量控制和贮藏... 855第三十二章 符合GLP原则的微核试验技术... 858第一节 啮齿类动物体内骨髓细胞微核试验程序... 858第二节 体外细胞微核试验... 859第三节 微核试验的标准操作规程... 864第四节 微核试验的试验方案、报告及审核... 865第三十三章 符合GLP原则的染色体畸变试验... 875第一节 体内染色体畸变实验方法学... 875第二节 体外染色体畸变试验程序... 878第三节 体内外染色体畸变试验常用程序... 888第四节 体外细胞遗传学代谢活化系统的应用... 908第五节 染色体畸变试验方案和报告的起草及审查... 912第三十四章 DNA的损伤与修复检测——彗星试验及UDS试验... 924第一节 DNA损伤的检验——彗星试验程序... 924第二节 应用程序外DNA合成（UDS）试验检测大鼠肝细胞DNA修复... 926第三节 人细胞DNA修复试验... 930第四节 用[H]—脱氧尿苷分析DNA修复试验... 932第五节 放射自显影DNA修复实验... 933第六节 与UDS相关SOP. 934第七节 UDS实验试剂配制... 955第三十五章 哺乳动物细胞基因突变试验标准操作程序... 971第一节 哺乳动物细胞致突变试验概述... 971第二节 L5178Y小鼠淋巴瘤TK基因正向突变试验... 973第三节 L5178Y/TK小鼠淋巴瘤试验方案的起草... 1001第四节 V79和V79衍生HPRT-/GPT+ G12细胞致突变试验... 1004第五节 CHO HGPRT 正向突变试验方案... 1007第三十六章 细胞转化试验方法学... 1013第一节 叙利亚地鼠胚胎细胞体外恶性转化试验... 1013第二节 BHK（幼年地鼠肾细胞）细胞转化试验... 1016第三节 实验瓶皿的气体调节和维持... 1017第四节 琼脂糖中克隆生长情况的计算... 1018第五节 细胞转化数据的评价... 1019第六节 细胞转化试验标准操作规程实例... 1020第七节 细胞转化试验试剂配制... 1032第五篇 在GLP条件下的生殖毒理学性试验方法学... 1第三十七章 生殖毒理学性试验概述... 1第一节 生殖毒理学试验方法学进展... 1第二节 GLP要求... 3第三节 ICH推荐的研究方案—— 联合研究... 3第四节 方法学问题... 6第三十八章 符合GLP法规的生殖毒理学方法... 13第一节 啮齿类产前发育毒性体内评估... 13第二节 体外致畸试验——中面部组织和继发腭的器官培养... 26第三节 雄性生殖毒理学体内模型... 33第四节 啮齿类交配指导原则... 40第五节 雄性生殖系统组织病理学技术... 45第六节 睾丸精子头计数程序... 54第七节 体外致畸研究中大鼠胚胎的培养... 58第八节 致畸试验操作程序—— 大鼠... 65第九节 致畸试验操作程序——兔子... 68第十节 剔除胎鼠和胎兔内脏进行骨骼检查程序... 71第十一节 对胎兔和胎鼠进行茜素染色... 72第十二节 胎兔和胎鼠的骨骼检查程序... 74第十三节 Bouin"s液固定胎鼠的观察程序... 75第十四节 Bouin"s液固定胎兔的观察程序... 76第十五节 大（小）鼠显性致死试验程序... 77第十六节 大小鼠一代繁殖试验程序... 79第十七节 啮齿类胎儿的形态学和行为学观察程序... 80第十八节 阴道涂片以判定是否交配成功程序... 83第十九节 繁殖试验：生产和泌乳... 83第二十节 胎儿性别辨别与称重（啮齿类）程序... 84第二十一节 胎儿的断奶、随机分组、编号及处理（啮齿类）程序... 85第二十二节 阴道涂片确定动情周期——大鼠... 86第三十九章 生殖毒理学试验质量控制与审查... 87第一节 简介... 87第二节 发育和生殖毒性试验的质量保证... 87第三节 质量关注和质量控制措施... 92第四节 结论... 95第五节 生殖和发育毒理学研究的审查——实例... 96第四十章 生殖发育毒理学术语... 105第六篇 体外细胞毒理学................................................................................................... 117第四十一章 体外毒理学在药物安全性评价中的应用简介... 117第一节 概述... 117第二节 体外试验的证实程序... 118第三节 体外试验加入管理要求中的程序... 119第四节 体外试验被考虑接受的领域... 119第五节 对于医学产品临床前开发的一般指导... 120第六节 欧洲替代方法证实中心... 120第七节 体外毒理学实验的优缺点比较... 120第八节 人体肝组织培养材料在代谢、毒理学研究中的应用... 121第九节 研究肾脏毒性体外模型的进展... 123第十节 心血管细胞培养技术在药理、毒理学中的应用... 126第十一节 肝细胞制备实例—实验动物原位灌流分离完整肝细胞... 128第十二节 肝细胞制备——切除肝脏的灌流... 131第十三节 肝细胞冻存... 132第十四节 肝细胞培养在药物安全性评价中的应用... 133第四十二章 哺乳动物细胞组织培养技术... 134第一节 概述... 134第二节 无菌技术... 134第三节 单层细胞的胰酶消化和传代程序... 137第四节 悬浮培养基中细胞的传代程序... 138第五节 在单层培养基中生长的人体细胞的冻存程序... 139第六节 悬浮培养基中生长细胞的冻存程序... 140第七节 冻存细胞的解冻和复苏程序... 140第八节 细胞计数及存活率测定程序... 141第九节 支持试验程序... 142第十节 评论... 144第四十三章 检测细胞毒性的体外方法... 146第一节 细胞毒性试验总则... 146第二节 细胞存活率测定标准操作程序... 147第三节 检测细胞毒性的试剂和溶液... 157第四节 评论... 158第五节 细胞毒性试验SOP实例... 165第六节 细胞毒性试验基本操作规程... 167第七篇 毒理统计学.......................................................................................................... 177第四十四章 统计学在毒理学安全性评价中的应用... 177第一节 前言... 177第二节 选择统计学方法的原则... 178第三节 假设检验：单因素参数检验... 181第四节 分类和分级资料的假设检验... 194第五节 在毒理学中数据分析的应用... 202第六节 综合评价实验结果的统计学意义和生物学意义... 206第四十五章 毒理学安全性评价中毒理统计学问题... 207第一节 毒理统计学中的常见文体及术语... 207第二节 常用统计学问题... 212第四十六章 发育生殖毒理学试验与致癌试验的统计分析问题... 240第一节 发育生殖毒理学试验与致癌试验的统计分析问题... 240第二节 啮齿类动物致癌试验统计学分析... 250第八篇 符合GLP原则的供试品管理... 254第四十七章 在GLP原则下供试品与对照品的管理... 254第一节 供试品管理的概述... 254第二节 供试品管理标准操作程序模版... 259第九篇 符合GLP原则的仪器设备管理... 273第四十八章 符合GLP原则的仪器设备管理总论... 273第一节 仪器设备管理的GLP要求... 273第二节 仪器设备管理校准与维护的SOP 的起草指导... 277第三节 仪器校准与维护的SOP. 279第四节 仪器校准与维护的SOP-SOP开发的流程图... 282第五节 仪器校准与维护的SOP-SOP撰写的细节部署... 285第四十九章 计算机的安全与管理... 288第一节 计算机安全1——逻辑安全... 288第二节 GLP条件下计算机系统的数据备份和恢复... 293第三节 计算机安全3——系统归档和还原... 297第五十章 仪器设备SOP实例... 300第十篇 质量保证与质量控制... 310第五十一章 质量保证部门及其职责... 310第一节 质量保证部门及其职责概述... 310第二节 如何建立质量控制与质量保证体系... 315第三节 OECD一种符合性实验室检查和审核操作指导原则简介... 319第五十二章 毒理学具体试验的审查... 327第一节 GLP符合性非临床研究机构的质量保证部的职责... 327第二节 一般毒理质量控制... 330第三节 免疫毒理学质量控制考虑... 336第四节 遗传毒理学研究的质量控制... 338第五节 如何审核病理学数据... 340第六节 啮齿动物致癌研究的病理学质量保证... 342第七节 临床病理学实验室质量控制及检查... 348第八节 确定符合GLP标准要求的核查... 348第五十三章 非临床安全性评价机构人员考核内容... 357第一节 专题负责人的管理和职责... 357第二节 试验机构人员考核考虑的问题... 363第十一篇 符合GLP原则的研究资料归档... 368第五十四章 符合GLP原则的资料归档程序... 368第一节 概述... 368第二节 原始资料的归档... 370第三节 符合GLP原则的电子资料归档的指导原则... 376第五十五章 归档的标准操作规程范例... 381第十二篇 毒理学试验设计方案模板... 391第五十六章 毒理学试验方案模版... 391第一节 GLP法规对试验方案的要求... 391第二节 一般毒性试验方案模版... 393第三节 局部毒性试验方案模版... 398第四节 遗传毒理学试验方案模版... 416第五节 啮齿类长期致癌试验... 418第七节 体外细胞毒理学试验方案... 424第八节 安全性药理学研究模板... 429第十三篇 毒物动力学... 434第五十七章 毒物动力学在药物非临床 安全性评价中的基本原理和应用... 434第一节 毒物动力学概述... 434第二节 毒代动力学研究指标... 436第三节 生理毒物动力学（PBTK）... 440第四节 毒物动力学的应用... 441第五节 小结... 453第十四篇 新技术新方法... 454第五十八章 在现代毒理学研究中的新技术应用... 454第一节 PCR的标准程序及优化... 454第二节 在凝胶和印迹中放射标记蛋白的检测及定量... 462第三节 Northern斑点分析... 468第四节 单向蛋白质SDS凝胶电泳... 476

【答案】：BAmes试验的遗传学终点是基因突变，微核试验的检测终点是原发性DNA损伤即DNA完整性改变，染色体畸变试验、显性致死试验的检测终点是染色体畸变，程序外DNA合成试验检测终点是DNA损伤。